陶斯阳

    病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)是由柯萨奇病毒、埃可病毒等多种病毒感染诱发的,以局限性或弥漫性炎症改变为主要病理表现的感染性心肌病,为常见的心脏疾病之一[1]。病毒性心肌炎好发于40岁以下的青壮年人群,资料显示,其在世界范围内的发病率为0.12%～12.00%,我国发病率略高,为5%～15%,并且呈逐年上升趋势[2]。该病起病隐匿,病情复杂,大部分可痊愈,但有研究显示,若治疗不当,10%～20%的病人可发展为扩张型心肌病[3],而8%～12%的病人会发生心源性猝死[4],严重威胁病人的生命健康。目前,病毒性心肌炎尚无特异性疗法,西医临床治疗以自由基清除剂为主,抗病毒药、免疫抑制剂等及其他对症疗法为辅,疗效并不理想。因此,寻找更为安全有效的药物成为研究的热点,而中医药以其独特的优势日益受到关注。丹参酮ⅡA为中药丹参活性成分之一,其注射剂治疗病毒性心肌炎有显著的临床疗效,且安全性较高[5]。本研究主要通过观察丹参酮ⅡA对Toll样受体4(TLR4)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨其对病毒性心肌炎小鼠的保护作用。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 无特定病原体(SPF)级4～6周龄雄性健康BALB/C小鼠75只,由第三军医大学第三附属医院野战外科研究所提供,动物生产许可证号:SCXK(渝)2017-0005,体质量16～20(18.25±1.13)g。所有小鼠饲养于动物实验室,保证环境恒温21～23 ℃,恒湿50%～60%,有良好的通风和采光,自然光线,自由饮用灭菌纯水,进食普通饲料,适应性饲养5 d。

    1.2 实验药品与试剂 柯萨奇病毒B3(CVB3)Nancy病毒、人宫颈癌细胞(Hela细胞)购自美国ATCC公司。丹参酮ⅡA,CAS号:568-72-9,纯度:高效液相色谱(HPLC)≥98%,规格:每瓶20 mg,购自南京道斯夫生物科技有限公司,采用0.9% NaCl配成浓度2.5 mg/mL、5.0 mg/mL的丹参酮ⅡA溶液,现用现配;利巴韦林颗粒,规格:每袋0.1 g,国药准字H10970280,生产批号:20190314,沈阳药科大学制药有限公司生产,采用0.9% NaCl溶解配成浓度为6.7 mg/mL的利巴韦林溶液,现用现配。磷酸盐缓冲液(PBS)、含吐温的Tris缓冲盐溶液(TBST)购自北京凯瑞基生物科技有限公司;苏木精-伊红(HE)染色试剂盒购自爱必信(上海)生物科技有限公司;大鼠肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒购自武汉维克赛思科技有限公司;TNF-α、IL-6、IL-1β免疫组化试剂盒购自上海雅吉生物科技有限公司;3,3-二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒购自北京伊塔生物科技有限公司;蛋白裂解液(RIPA)购自北京百奥莱博科技有限公司;考马斯亮蓝法蛋白含量测试盒购自上海瑶韵生物科技有限公司 ......