赵丽娜,徐 明,侯 静

    缺血性心脏病为心内科常见的心血管疾病,以心肌缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤为主要临床表现[1]。缺血后的再灌注会产生多种自由基和细胞因子等物质,导致心肌细胞氧化应激损伤和功能受损;同时会诱导心肌细胞程序性死亡,导致有效心肌细胞数目减少,心肌损伤进一步加重[2-3]。因此,减少心肌细胞氧化应激损伤和凋亡是治疗心肌I/R损伤的关键所在。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)为一类长度超过200个核苷酸的新型非编码RNA,其在多种细胞的增殖、分化和代谢中发挥重要作用[4]。HOXA转录本反义RNA 1(HOXA transcript antisense RNA,myeloid-specific 1,Hotairm1)是近年发现的新型lncRNA,研究显示,在心肌细胞分化及I/R心肌中lncRNA Hotairm1显著上调,促进心肌细胞凋亡,加重心肌细胞I/R损伤,但lncRNA Hotairm1在缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导的心肌细胞氧化应激损伤和凋亡中的作用机制并未明确[5-6]。因此,本研究拟探讨lncRNA Hotairm1对H/R心肌细胞氧化应激损伤和凋亡的影响,并结合微小RNA-129-5p(microRNA-129-5p,miR-129-5p)探究其作用机制,以期为lncRNA Hotairm1/miR-129-5p在防治缺血性心脏病I/R损伤中的应用奠定理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 细胞株 大鼠心肌细胞 H9c2购自中国医学科学院细胞库。

    1.1.2 药品与试剂 DMEM培养基、胎牛血清购于美国Gibco公司;青霉素/链霉素双抗溶液、胰酶购自南京森贝伽生物科技有限公司;Trizol试剂、RIPA裂解液及二喹啉甲酸(BCA)试剂盒购于上海碧云天生物科技有限公司;空载体(pcDNA)、小干扰RNA对照(si-Con)、miRNA抑制物对照(anti-miR-Con)、miRNA模拟物对照(miR-Con)、miR-129-5p模拟物(miR-129-5p mimics)及lncRNA Hotairm1小干扰RNA(si-lncRNA Hotairm1)、lncRNA Hotairm1过表达载体(pcDNA-lncRNA Hotairm1)、miR-129-5p抑制物(anti-miR-129-5p)购自广州锐博生物有限公司;噻唑蓝(MTT)增殖及Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所;乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)及活性氧(ROS)检测试剂盒购自江苏凯基生物公司;兔源β-actin抗体、兔源活化的Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9一抗及辣根过氧化物酶(HRP)标记山羊抗兔IgG二抗购自美国Abbiotec公司 ......