樊帅帅,宋磊军,蔺 聪

    心肌梗死(myocardial infarction,MI)指因冠状动脉狭窄或堵塞引起的心肌持续性缺血、缺氧性坏死[1]。心律失常及传导障碍是心肌梗死的主要病理症状,也是导致心肌梗死发病率及死亡率增加的主要因素之一[2]。减少心肌梗死诱发的心律失常,对缓解心肌梗死病死率有重要意义。异氟醚是心脏搭桥手术过程中的常用麻醉剂,研究发现异氟醚对缺血心肌组织有保护作用且能降低恶性心律失常病人的病死率[3-5]。因此,异氟醚可能为缓解心肌梗死心律失常的潜在药物,但其具体作用机制尚不明确。研究发现,多种炎性因子不仅可造成心肌细胞炎性损伤,还可影响心肌细胞动作电位的改变及传导,与心肌梗死后心律失常的发生发展密切相关[6]。Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)及c-Jun N末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)通路是调控炎症反应的关键通路,且参与调控心肌梗死后心肌细胞L-型钙电流、细胞过度挛缩等过程,与心律失常的发生发展密切相关[7-8]。本研究建立大鼠心肌梗死模型,从TLR4/JNK信号通路探究异氟醚影响心肌梗死大鼠心律失常的可能机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 动物及细胞来源 6～7周龄无特定病原体(SPF)级SD大鼠120只,体质量180～200 g,购自甘肃中医药大学[许可证号为:SCXK(甘)2020-0001]。本实验经医院动物护理和使用委员会(IACUC)批准(编号:105062)。

    1.1.2 实验试剂及仪器 异氟醚(货号:JKLN010784a,上海经科化学科技有限公司);苏木精-伊红(HE)及Masson染色试剂盒(货号:AG1120、GMS80012,上海吉至生化科技有限公司、深圳子科生物科技有限公司);四氮唑红染色法(TTC)染色试剂盒(货号:YT8005,北京伊塔生物科技有限公司);Fluo-3/AM钙荧光指示剂(货号:70-F1243,杭州联科生物技术股份有限公司);磷酸肌酸激酶(CK)试剂盒(货号:XG-E98764,上海西格生物科技有限公司);磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)试剂盒(货号:GOY13667,上海谷研实业有限公司);乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒(货号:YS-E8189,上海研生实业有限公司);儿茶酚抑素(CST)及超敏C-反应蛋白(hs-CRP)等酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒(货号:BS-E11100R1,E02680,江苏博深生物科技有限公司及上海瓦兰生物科技有限公司);TLR4、JNK2、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-β(IL-β)、核转录因子-κB(NF-κB)、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)等抗体(均购自美国abcam公司,货号:ab13556,ab76125、ab183218、ab254360、ab220803、ab239882、ab181052);PowerLab数据采集系统购自澳大利亚ADInstruments公司;Langendorff心脏灌流装置购自济南千司生物技术有限公司;L-420F生物机能实验系统购自成都泰盟科技有限公司 ......