李新华,郭 霞,赵立新

    血管性痴呆(vascular dementia,VD)是由各种复杂的脑血管因素引起的脑组织损害而造成以认知功能障碍为主要临床表现的一种痴呆综合征[1],是老年人群的常见病、多发病,是仅次于阿尔茨海默病的痴呆[2]。血管性痴呆作为目前唯一一种可以预防的痴呆类型,如果及早发现、早期诊断明确、及时干预治疗,血管性痴呆是可以防治的,是可逆的[3],但到目前为止,仍没有统一和有效的治疗方法[4]。因此,对于血管性痴呆防治的临床研究及实验研究具有相当重要的现实意义。“交通任督”针刺法是山西省中医院原针灸科主任郭耀康教授在长期针灸临床实践中创立的针灸理论和疗法,并将其应用于治疗血管性痴呆,疗效显著。随着对血管性痴呆发病机制的不断深入研究,脑源性神经营养因子在血管性痴呆发生发展过程中所发挥的作用越来越受到重视。本研究采用永久性结扎双侧颈总动脉(改良2-VO)法复制全脑缺血模型,以“交通任督法”取风府、百会、人中、关元、中脘穴位进行针刺干预,观察其对血管性痴呆大鼠空间学习记忆功能、海马CA1区组织细胞形态学及脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响,探讨交通任督针刺法干预血管性痴呆大鼠的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    健康成年SD大鼠60只,雄性,月龄2～3个月,体质量(210±10)g。由北京华阜康生物科技股份有限公司提供,许可证号:SCXK(京)2019-0004。按照随机数字表分为空白组(12只)、假手术组(12只)和手术组(36只)。

    1.2 实验药品及试剂

    尼莫地平片(商品名:尼膜同,拜耳医药保健有限公司生产),注射用青霉素钠[中诺药业(石家庄)有限公司],BDNF抗体(武汉三鹰生物技术有限公司),BDNF二抗(BiOS公司),聚偏二氟乙烯(PVDF)膜(Solarbio公司),二喹啉甲酸(BCA)蛋白浓度测定试剂盒(SEVEN公司),十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)快速凝胶配置试剂盒(SEVEN公司),彩虹130广谱蛋白Marker(Solarbio公司),β-actin内参引物[生工生物工程(上海)股份有限公司],超敏增强型化学发光试剂(ECL)检测试剂盒(赛文生物技术有限公司)。

    1.3 实验材料及仪器

    汉医牌一次性使用无菌针灸针(长春爱康医药器械有限公司,规格为0.25 mm×13 mm);Morris水迷宫(型号:DMS-2,中国医学科学院药物研究所);全自动全封闭脱水机(型号:Excelsior,美国Thermo公司);石蜡包埋机(型号:TKY-BMB,湖北康泰医疗设备有限公司);包埋专用冷台(型号:TKY-BMB,湖北秦康医疗设备有限公司);旋转石蜡切片机(型号:F325,德国Thermo公司);摊片机(型号:TKY-TPA,湖北泰康医疗设备有限公司);烤片机(型号:TKY-TPA,湖北泰康医疗设备有限公司);万能荧光成像系统(型号:BX51-DP72,日本奥林巴斯);电热恒温鼓风干燥箱(型号:101-2-S,上海跃进医疗器械厂);低温台式离心机(型号:Auegrax-30K,美国 Beckman Coulter公司);脱色水平摇床(型号:TS-1000,海门市其林贝尔仪器制造有限公司);双向电泳系统(PROTEANi12 IEF Mini-PROTEAN Tetra PROTEAN 11 XL,美国Bio-Rad公司);半干式转印系统(TRans-Blot SemiDry PowerPac Universal,美国Bio-Rad公司);高性能成像分析仪(型号:HD2,美国ProteinSimple公司) ......