孟培培,王 蓓,刘 光,董魁星,麻继臣

    随着生活习惯的改变和生活压力的增加,全球恶性肿瘤发生率均呈上升趋势,乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一,其发病率在全球范围内呈上升趋势[1]。相关研究显示,人表皮生长因子受体2(HER2)是一种跨膜受体样蛋白,在乳腺癌病人体内过表达[2],HER2阳性乳腺癌具有侵袭能力强、转移率高等特点,对常规放疗、化疗不敏感,易复发,预后不良[3]。曲妥珠单抗(Trastuzumab,商品名:赫赛汀)是一种重组人源化单克隆抗体,研究证实其可靶向HER2抑制乳腺癌细胞增殖,发挥显著的治疗效果,提高HER2阳性乳腺癌病人存活率[4-5]。曲妥珠单抗的抗肿瘤效果值得肯定,随着用药时间的延长和用药剂量的增加,对病人心脏功能具有明显的副作用[6],如充血性心力衰竭、高血压、缺血性心脏病、血栓栓塞性疾病等[7-8]。人参皂苷是我国传统中药人参的主要有效成分之一,是一种糖氧苷类化合物[9]。现代药理学研究表明,人参皂苷对心血管系统、免疫系统等均具有不同程度的保护作用[10],但其对曲妥珠单抗引起的心功能损伤影响尚未明确。RhoA/RhoA相关蛋白激酶(ROCK)信号通路是机体内的一种基础信号通路,参与多种生命活动,有研究显示,抑制RhoA/ROCK信号通路的表达可有效抑制炎症与氧化应激发生,减少细胞凋亡[11]。本研究采用曲妥珠单抗引起大鼠心功能受损及曲妥珠单抗培养心肌细胞H9c2,探讨人参皂苷Rg2调控RhoA/ROCK信号通路对心功能及心肌细胞损伤的影响,为临床应用人参皂苷Rg2预防曲妥珠单抗引起的心功能受损提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物与细胞

    无特定病原体(SPF)级Wistar雌性大鼠30只,8周龄,体质量为200～220 g,购自河北省实验动物中心,动物生产许可证号为SCXK(冀)2018-004。实验过程严格按照实验动物管理条例进行,符合“3R”原则。心肌细胞H9c2由美国ATCC细胞库提供。

    1.2 实验药物及试剂

    曲妥珠单抗(19/108)购自美国NIBSC公司;人参皂苷Rg2(YT64382)购自北京伊塔生物科技有限公司;DMEM培养基(iCell0001)购自上海赛百慷生物技术有限公司;肌酸激酶同工酶(CK-MB)检测试剂盒(SEKR-0059)、乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(BC0685)购自北京索莱宝生物技术公司;肿瘤坏死因子(TNF)-α检测试剂盒(H052-1)、白细胞介素(IL)-6检测试剂盒(H007-1-1)、丙二醛(MDA)检测试剂盒(A003-1-2)、超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒(A001-3-2)购自南京建成生物工程研究所;膜联蛋白V(Annexin V)-FITC/碘化丙啶(PI)凋亡检测试剂盒(SOS-174)购自北京凯诗源生物科技有限公司;RhoA抗体(ab187027)、ROCK抗体(ab45171)、辣根过氧化物酶标记山羊抗兔二抗(ab6721)购自英国Abcam公司 ......