李 丹,徐沙丽,王 颖,张俊霞

    脑缺血是由脑动脉狭窄或闭塞、脑动脉栓塞、血流动力学、血液学等多种原因导致的局部或多部位的供血不足性疾病,是一种常见病,供血及供氧减少会导致组织损伤及坏死,而脑缺血再灌注可能会进一步加重病情及功能紊乱,影响病人的预后及生活质量[1-2]。近年来,越来越多的研究显示,缺血并不是脑组织损伤的主要原因,而是由血供恢复后过量的自由基攻击重新获得血液供应的组织内的细胞造成的,称为脑缺血再灌注损伤[3-4]。研究显示,炎症与神经元细胞死亡和神经系统功能紊乱密切相关[5]。葡萄籽原花青素是从葡萄籽中提取的生物类黄酮,具有较强的清除自由基、抗氧化活性,可减轻脑缺血再灌注大鼠缺血区病理改变,减轻脂质过氧化,改善大鼠学习和记忆功能,发挥脑保护作用[6]。核转录因子-κB(NF-κB)在炎症发生过程中具有关键作用[7]。Toll样受体(TLR)是一种跨膜受体,而TLR4作为其中的一种亚型,主要识别不同的病原相关分子模式,进而导致炎性细胞分泌增加,引起全身炎症反应[8]。因此,本研究基于NF-κB/TLR4信号通路探讨葡萄籽提取物对脑缺血再灌注损伤大鼠模型的影响并分析其作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物与药物

    8周龄SD大鼠40只,体质量(230±30)g,购自北京市华阜康生物技术股份有限公司,动物许可证号:SCXK(京)2020-0004。饲养环境保持干燥、通风、安静,大鼠自由进食、饮水,室内温度22 ℃,相对湿度60%,适应性喂养2周。葡萄籽提取物(提取率为8%,原花青素含量为95%)购自天津市尖峰天然产物研究开发有限公司,批号:002-1503012-27。

    1.2 试剂及仪器

    苏木精-伊红(HE)染色试剂盒购自武汉百浩天生物科技有限公司;酶联免疫吸附(ELISA)法试剂盒购自四川迈克生物科技股份有限公司;白细胞介素(IL)-1β、IL-6检测试剂盒由广州新晋生物科技有限公司提供;肿瘤坏死因子-α(TNF-α)检测试剂盒购自辽宁天医生物制药有限公司;B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)试剂盒、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)试剂盒均购自江苏睿捷生物科技有限公司;Caspase-3检测试剂盒购自广州铭安生物科技有限公司;TLR4、NF-κB p65及NF-κB p65一抗、二抗均购自深圳市益百顺科技有限公司;电子天平YP80001型购自河北传维化工有限公司;低温离心机(型号5810R)购自深圳诸夏科技有限公司;正置显微镜(GR-29J-2型)购自广东金相检测技术有限公司;电泳仪、转膜仪购自深圳市文乐生物科技有限公司;凝胶成像仪系统由北京华圣科仪实验设备有限公司提供 ......