李耀征,白保强,孙亚勤,王 贺

    心肌梗死是一种死亡率较高的心血管疾病,多数病人因冠状动脉血栓、动脉粥样硬化引发,若不能及时治疗,导致心肌炎症损伤和纤维化,心功能障碍,最终造成心力衰竭,严重影响病人生命健康[1-3]。炎症反应在心肌梗死的病理生理过程中发挥着关键作用,抑制炎性因子白细胞介素(IL)-1β、IL-1、IL-6等表达,下调致纤维化因子转化生长因子(TGF)-β1表达,减轻心肌炎症和纤维化,缓解心肌梗死引发的心脏重构过程[4-5]。NADPH氧化酶4(NADPH oxidase 4,Nox4)和蛋白激酶Cα(protein kinase C-alpha,PKCα)是调控炎症及氧化应激的重要蛋白酶,激活两者活性,促使活性氧生成,并上调半乳糖凝集素3(galectin3,Gal-3)表达,引发组织细胞严重的炎症反应和过氧化损伤;下调Nox4,可抑制PKCα和Gal-3表达,减轻心肌炎症损伤,抑制心肌成纤维细胞激活,改善心肌梗死后的不良心脏重塑[6-7],由此可知,Nox4/PKCα/Gal-3通路是防治心肌梗死后心肌纤维化的靶点之一。柴胡皂苷D是常用中药柴胡中的主要活性成分,通过抑制核转录因子(NF)-κB信号转导发挥抗炎作用,维持阿尔茨海默病小鼠海马神经元正常形态,减少凋亡,减轻软骨组织炎症,抑制软骨细胞凋亡,改善骨关节炎症状[8-9]。张洁等[10]研究显示,柴胡皂苷D通过增加急性心肌梗死大鼠抗氧化能力,减轻心肌炎症损伤,保护心功能。本研究基于Nox4/PKCα/Gal-3通路探讨柴胡皂苷D对心肌梗死大鼠心肌纤维化的影响,现报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 实验动物

    SD大鼠由南京青龙山实验动物中心提供,许可证号:SCXK(苏)-2018-0001,无特定病原体(SPF)级,雄性,体质量180～210 g,饲养在医院实验动物中心,严格按照《中华人民共和国实验动物管理条例》要求进行饲养,动物房温度23～25 ℃,湿度50%～55%,噪声≤50 dB。

    1.1.2 实验试剂与仪器

    柴胡皂苷D购自上海吉至生化科技有限公司(HPLC≥98%),货号S15760;Apocynin购自美国Selleck Chemicals公司,货号S2425;苏木精-伊红(HE)染色试剂盒、Masson染色试剂盒、IL-6酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒、二喹啉甲酸(BCA)试剂盒、RIPA裂解液购自南京建成生物工程研究所,货号分别为D006-1-1、D026-1-3、H007、A045-4-2、W062-1-1;IL-1β ELISA试剂盒、TGF-β1ELISA试剂盒、兔源β-actin一抗、兔源Nox4一抗、兔源PKCα一抗、兔源Gal-3一抗、羊抗兔二抗购自美国Abcam公司,货号分别为ab255730、ab119558、ab8227、ab133303、ab32376、ab76245、ab150077等 ......