刘旭光,陈 晨,吴 斌,胡家芸,项 娜

    冠心病是一种缺血性心脏病,在病理学上以动脉粥样硬化为特征,这是一种与炎症密切相关的慢性病理过程[1-2]。目前,有关冠心病的治疗(包括他汀类等药物治疗和冠状动脉旁路移植等非药物治疗)和对危险因素(如吸烟、糖尿病并发症或高血压)的识别取得了一定研究进展,但冠心病仍然是死亡的主要原因[3-4]。因此,寻找包括长链非编码RNA(lncRNA)在内的新型生物标志物对于预防和治疗冠心病具有重要意义。lncRNA是长度>200个核苷酸并广泛分布在细胞核和细胞质中的非编码RNA[5]。研究表明lncRNA在多能性的调节和心脏特异性基因的激活中发挥重要作用[6],lncRNA在调节各种细胞过程方面起着关键作用,如血管内皮细胞(VECs)功能障碍、血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和脂质代谢[7-8]。血管内皮细胞重塑被认为是冠心病发病机制的关键[9]。氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)可以通过涉及成纤维细胞生长因子2(FGF2)启动子甲基化和抑制FGF2转录的丙二醛依赖性途径破坏人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)的生长和存活[10]。研究表明,lnc-MICALL2-2在冠心病病人中表达升高,其表达升高是冠心病的独立危险因素[11]。然而,lnc-MICALL2-2在冠心病诱导的血管内皮损伤及其特异性分子机制中尚未报道。本研究将ox-LDL诱导的HCAECs作为损伤模型,以探索lnc-MICALL2-2在冠心病发病机制中的生物学作用。本研究中使用HCAECs作为细胞,主要考虑:1)冠状动脉内皮损伤是冠心病发展的早期阶段;2)HCAEC被广泛用作工具细胞以探索氧化损伤,包括由ox-LDL引起的内皮功能障碍[12];3)使用的ox-LDL诱导的HCAECs损伤模型更接近冠心病的病理状况。

    1 材料与方法

    1.1 HCAECs的培养和鉴定

    HCAECs购于Sciencell,被选为血管内皮细胞模型,细胞培养基由Procell生命科学技术有限公司(中国武汉)提供。HCAECs在具有37 ℃、5%CO2的培养基中培养。细胞在单层中生长,并在细胞附着率达到90%时进行常规传代。倒置显微镜(奥林巴斯公司,日本)用于观察细胞形态和生长。

    血管性血友病因子(vWF)是血管内皮细胞合成过程中释放的蛋白质因子。vWF参与血液凝固和血栓形成,并作为鉴定体外培养的血管内皮细胞的特征因素。根据标准免疫组织化学染色技术染色HCAECs。用Cy3染料(红色)染色vWF,并用4′,6-二氨基-2-苯基吲哚染料(蓝色)复染细胞核 ......