冉娅娅,邓功建,宋欢欢

    高血压是心血管疾病的主要危险因素。全基因组关联研究已经确定了许多与血压调节相关的分子量>50 bp的单核苷酸多态性位点,这可以解释高血压的遗传倾向[1]。在前期的研究中发现,长链非编码RNA(lncRNA)-淋巴细胞白血病缺失基因1(DLEU1)的一个基因组位点与原发性高血压密切相关,DLEU1在血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMCs)中高表达,并推测这可能与血压升高和血管重塑有关,DLEU1基因可能是高血压的潜在诱发因素。DLEU1的缺失、突变和失控与人类口腔鳞状细胞癌相关,并被认为是潜在的肿瘤抑制基因[2]。此外,DLEU1基因在肾母细胞瘤中也被鉴定为肿瘤抑制基因[3],但潜在的机制仍然不确定。血管重塑在高血压的发病过程中起着关键作用,其特征是血管结构异常、血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移增加以及综合表型改变。此外,许多研究也证实了p38和c-jun氨基末端激酶(JNK)在血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡过程中的重要作用[4-5]。p38/JNK可能通过不同的分子机制参与多种血管疾病,是治疗血管疾病的新靶点。然而,关于DLEU1对VSMCs功能的调节作用以及是否由p38和JNK介导仍不确定。因此,本研究旨在探讨阻断p38和JNK通路能否改变DLEU1转基因大鼠(DLEU1 transgenic rats,DTRs)的血压、心脏参数和血管结构。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物及分组

    12只DTRs大鼠委托赛业生物科技有限公司构建并验证。用戊巴比妥钠(120 mg/kg)腹腔注射麻醉12周龄雄性DTRs大鼠,开胸取心,解剖主动脉进行后续实验。用无创尾套法和BP-98A系统测量大鼠的收缩压、舒张压、平均血压和心率。测量心脏不同成分的重量,评价心脏肥大程度。主动脉、心脏、肾脏组织用4%多聚甲醛固定,石蜡包埋切片。切片用苏木精-伊红(HE)染色确定主动脉、心脏和肾脏的形态结构,用Massontri铬染色评估胶原面积和纤维化程度。使用Image-Pro Plus软件测定血管的中层厚度、血管直径、中膜面积、管腔面积和中膜/管腔面积比。计算同一组织切片内不同位置的5个随机测量值的平均值,得到各降主动脉的中层厚度。为了确定JNK和p38的作用,将12只大鼠随机分为对照组、DTRs组、p38组、JNK组。对照组:按照15 mg/kg体质量标准,对Wistar大鼠腹腔注射二甲基亚砜溶液;DTRs组:按照15 mg/kg体质量标准,对DTRs大鼠腹腔注射二甲基亚砜溶液;p38组:将1 μmol/L浓度的p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)特异性抑制剂SB203580溶解于二甲基亚砜溶液中,按照15 mg/kg体质量标准进行腹腔注射;JNK组:将1 μmol/L浓度的JNK抑制剂SP600125溶解于二甲基亚砜溶液中,按照15 mg/kg体质量标准进行腹腔注射 ......