刘 斌,刘 娜,曹广林

    随着生活方式的改变和生活节奏的加快,心血管疾病的发生率逐渐趋于年轻化。心肌缺血再灌注损伤造成的心肌细胞凋亡和线粒体功能障碍是心肌缺血再灌注病人发生心力衰竭的主要原因[1]。研究表明,降低炎症反应和氧化应激水平可明显减少心肌细胞凋亡,改善线粒体功能障碍[2]。miRNA是一种单链非编码RNA,研究发现,多种miRNA参与调节心肌缺血再灌注损伤[3-5],miRNA-93-5p对脓毒症造成的心肌损伤以及糖尿病肾病等具有保护作用[6-7]。本研究旨在探讨miR-93-5p在缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)心肌细胞中的作用。

    1 材料与方法

    1.1 细胞系

    大鼠H9c2心肌细胞购自中国科学院上海细胞生物学研究所。

    1.2 试剂及仪器

    超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)试剂盒购自南京建成生物工程研究所;白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒购自武汉博士德生物有限公司;miR-93-5p阴性对照片段以及miR-93-5p mimic购自上海吉玛制药技术有限公司;miR-93-5p和U6的聚合酶链式反应(PCR)引物序列购自中国广州锐博公司;兔抗大鼠活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specificproteinase-3,Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)一抗购自英国Abcam公司;辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔二抗购自美国Sigma公司;DMEM培养基购自北京华美试剂公司;超净工作台购自沈阳市医疗器械二厂;培养箱购自美国NAPCO公司 ......