杜 玥,李 莎,梅齐建,肖 鸣

    心肌缺血/再灌注(myocardial ischemic/reperfusion,MI/R)损伤的诱因主要是心肌梗死、心肌缺血等,其发生机制十分复杂,是临床治疗的难题[1]。细胞凋亡、炎症反应和氧化应激是MI/R损伤的重要原因。研究表明,高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)/Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)/核因子κB(nuclear factor κB,NF-κB)信号通路与MI/R损伤的发生联系密切[2]。HMGB1在几乎所有细胞类型中都有表达,抑制HMGB1表达可使其受体TLR4表达下降,导致下游NF-κB转录活性降低,从而起到减轻细胞损伤和炎症反应的效果[3]。蓝萼甲素(glaucocalyxin A,GLA)提取自蓝萼香茶菜,是一种具有广泛生物活性的二萜类化合物。GLA已被证实在氧化应激、免疫、抗炎等方面起作用[4]。同时,在乳腺癌中,GLA不仅能通过激活p53蛋白表达抑制细胞增殖和细胞周期进程[5],还能通过抑制磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路促进细胞凋亡[6];另外,GLA可通过下调糖原合成酶激酶-3β(GSK3β)/β-catenin信号通路相关蛋白表达从而明显抑制肺成纤维细胞转化[7]。研究发现,GLA通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路不仅能减轻卵清蛋白诱导的哮喘小鼠呼吸道炎症[8],也能调节人滋养细胞的炎症反应[9],还能减轻肥大细胞脱颗粒导致的过敏反应[10]。然而,GLA是否通过调节HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路影响心肌细胞损伤还未可知。因此,本研究将通过构建H9c2细胞缺氧/复氧(H/R)损伤模型,观察GLA对H/R诱导的H9c2细胞损伤的影响,并探讨GLA是否通过HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路干预H/R诱导的H9c2细胞损伤。

    1 材料与方法

    1.1 细胞与主要试剂、仪器

    H9c2细胞购自中国科学院上海细胞库;GLA购自上海源叶生物科技有限公司;HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路抑制剂甘草酸(glycyrrhizin)购自上海蓝木化工有限公司;胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)、DMEM培养基购自南京森贝伽生物科技有限公司;细胞计数试剂盒(CCK-8)、细胞凋亡检测试剂盒购自美国Amresco公司;兔抗HMGB1、TLR4、NF-κB p65抗体(anti-HMGB1、anti-TLR4、anti-NF-κB p65、anti-p-NF-κB p65)及辣根过氧化物酶标记的二抗购自美国Thermo Fisher公司;乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒均购自上海酶联生物科技有限公司 ......