武报佳,邢慧敏,郭 华,赵 睿,孙 波,李 燕

    急性心肌梗死(AMI)是心血管系统常见疾病,多指冠状动脉损伤导致血流减少或中断,心肌组织长时间缺血导致,是一种急性冠脉综合征[1]。流行病学调查显示,AMI病人发病主要集中在欧美国家,美国发病率为508/10万且逐年升高,我国AMI发病率为45/10万～55/10万,临床表现为心前区疼痛或出现憋闷,发病人群存在年轻化趋势,45岁以下为高发人群[2]。以往研究表明,成熟的心肌细胞不会发生凋亡,缺血缺氧是导致心肌细胞死亡的主要原因[3]。近些年相关文献证实,AMI疾病出现再灌注损伤时会导致心肌细胞凋亡,其产生机制是由多种信号通路共同参与导致。Toll样受体(TLRs)是一种重要模式识别受体家族,TLR4是其家族成员之一,在心肌细胞中表达[4]。髓样分化因子(MyD88)联合TLR4后能够激活核转录因子-κB(NF-κB)而发挥信号传导作用。体外实验证实,心肌缺血再灌注大鼠NF-κB能够激活JNK1/2导致NF-κBp65核转位而加快心肌细胞凋亡[5-6]。葡萄籽多酚(grape seed polyphenols,GSP)是一种天然植物多酚,其活性成分包含酚酸类物质茶儿素及黄烷醇类。GSP在食品和保健品的研究较广泛,已经证实GSP在心血管疾病中具有保护作用[7]。本研究观察GSP对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡及TLR4/NF-κB蛋白的影响。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    无特定病原体(SPF)级SD雌性大鼠,鼠龄6周,共60只,均购自浙江维通利华实验动物技术有限公司,体质量200～300 g,动物许可证号:SCXK(浙)2019-000l。饲养在湿度55%、温度25 ℃的环境下,模拟黑白交替无菌饮食2周,定时清洗、消毒鼠笼,实验要求符合《实验动物管理条例》管理规定。

    1.2 主要药物、试剂与仪器

    GSP购自中国西安双德生物;阿托伐他汀购自中国北京嘉林药业;戊巴比妥钠、阿托品、氯胺酮、地西泮(安定)及注射用青霉素钠均购自中国广州粤丰公司;TLR4、NF-κB抗体均购自Abcam;封闭用正常山羊血清购自中国北京百奥莱公司;苏木精-伊红(HE)试剂盒购自西安永屹生物技术;FlexiWash全自动蛋白质免疫印迹系统购自环亚生物科技有限公司 ......