刘 盼,王晓英,韩 丹

    冠心病具有高发病率和高死亡率等特点,心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury,MI/RI)是冠心病的主要病理表现,主动脉血管壁斑块破裂可促进血栓形成并阻塞血管腔,造成心肌缺血性损伤,在一定时间内恢复血液供应,导致心肌二次受损,这一过程被称为MI/RI[1-2]。MI/RI发病机制复杂,其中氧化应激、细胞凋亡、炎症等因素均参与MI/RI发生发展[3]。近年来研究发现,铁死亡是导致MI/RI发展的重要因素[4]。铁死亡是一种新的细胞死亡方式,具有铁离子依赖性,铁离子在细胞内代谢失衡可增加细胞内铁离子的蓄积,进而催化细胞膜不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应,诱导细胞铁死亡[5]。研究发现,蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/核因子红细胞系2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)/谷胱甘肽过氧化酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)信号通路的激活可抑制铁死亡[6-7]。地黄苷A(Rehmannioside A,ReA)是玄参科植物地黄中的重要活性成分,具有抗氧化、抗炎、抗凋亡等疗效[8]。研究发现,ReA可通过激活AKT/Nrf2/GPX4信号通路,抑制神经元铁死亡,从而发挥神经保护作用[9]。而ReA能否通过调控AKT/Nrf2/GPX4信号通路介导的铁死亡改善MI/RI尚鲜见报道。为此,本研究以铁死亡为切入点,旨在探究ReA对MI/RI大鼠的影响及其作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    90只体质量为220～250 g的无特定病原体(SPF)级SD大鼠,购自湖北贝恩特生物科技有限公司,生产许可证号为SCXK(鄂)2021-0027。所有大鼠均饲喂于温度24 ℃和湿度50%的动物房中,并提供12 h光/暗循环。

    1.2 主要试剂

    ReA(货号:YT61748)购自北京伊塔生物科技有限公司;Ferrostatin-1(Fer-1)(货号:F27030)购自上海吉至生化科技有限公司;perifosine(货号:S43190)购自上海源叶生物科技有限公司;乳酸脱氢酶(LDH)(货号:E-EL-R0576)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)(货号:E-EL-R1327)和心肌肌钙蛋白I(cTnI)(货号:E-EL-R1253)检测试剂盒均购自上海恒斐生物科技有限公司;氯代三苯基四氮唑(TTC)(货号:S0022)购自上海远慕生物科技有限公司;苏木素-伊红(HE)染色试剂盒(货号:C0105)和原位末端标记测定法(TUNEL)染色试剂盒(货号:C1086)均购自上海碧云天生物技术有限公司;谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)(货号:BC1190)、超氧化物歧化酶(SOD)(货号:BC0170)和丙二醛(MDA)(货号:BC0020)检测试剂盒均购自北京索莱宝科技有限公司;Fe2+含量检测试剂盒(货号:E1050)购自北京普利莱基因技术有限公司;兔源p-AKT(货号:ab192623)、AKT(货号:ab179463)、Nrf2(货号:b92946)、GPX4(货号:ab125066)、转铁蛋白受体1(TfR1)(货号:ab269513)、GAPDH(货号:ab199554)和辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔二抗(货号:ab205718)均购自Abcam公司 ......