何望安,王 茹,朱宏飞,蔡绍乾,魏 丹,余 成,单苏红

    心肌缺血再灌注损伤是指冠状动脉部分或完全急性梗阻后,恢复血流反而促使组织损伤加重,甚至出现不可逆损伤的现象。近年来,随着冠状动脉介入治疗、冠脉搭桥治疗以及冠状动脉溶栓等治疗手段的广泛应用,心肌缺血再灌注损伤所带来的二次损伤一定程度上影响了治疗效果[1]。因此,抑制心肌缺血再灌注损伤已然成为当代临床亟待解决的关键问题之一。目前对于心肌缺血再灌注损伤的防治主要包含缺血预处理和缺血后处理等手段[2],尽管具有一定疗效,但仍存在有一定局限性以及副作用等问题,仍需探索新的高效低副作用的药物。安五脂素源于华中五味子,是组成木脂素重要成分之一,已有研究报道安五脂素对衰老小鼠的心肌损伤具有保护作用[3]。然而安五脂素对心肌缺血再灌注损伤是否也发挥保护作用未知。针对心肌缺血再灌注损伤治疗的关键在于救活尚存活的心肌细胞、抑制心肌细胞凋亡,而再灌注损伤补救激酶(RISK)信号通路是细胞存活的关键机制之一[4]。RISK信号通路是蛋白激酶B(AKT)和细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)信号通路的组合,已有研究表明该通路在心肌缺血再灌注损伤中发挥重要作用[5-7]。然而安五脂素能否通过调控RISK信号通路在心肌缺血再灌注损伤中发挥作用未知。鉴于此本研究选取60只SD大鼠开展动物实验,探究安五脂素通过调控RISK信号通路影响大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 实验动物

    60只7～9周龄Sgrague Dawley(SD)大鼠,清洁级,雌雄各半,体质量200～250 g,购自广州锐格生物科技有限公司,实验动物生产许可证号:SCXK(粤)2021-0059,使用许可证号:SYXK(粤)2021-0259。

    1.1.2 实验药物与试剂

    安五脂素(购自上海信裕生物科技有限公司,生产批号:XY98539);乌拉坦(购自上海联硕生物科技有限公司,生产批号:U2500);大鼠血浆肌酸激酶(CK)酶联免疫吸附实验(ELISA)检测试剂盒、乳酸脱氢酶(LDH)ELISA检测试剂盒(购自上海研生实业有限公司,生产批号:YRX300332R、YS-H5426);2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)溶液(购自青岛高科技工业园海博生物技术有限公司,生产批号:HB0268a);苏木素-伊红(HE)染色试剂盒、总核糖核酸(RNA)提取试剂盒[购自生工生物工程(上海)股份有限公司,生产批号:E607318-0200、B511311-0100];AKT、ERK1/2、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、β-肌动蛋白(β-actin)聚合酶链反应(PCR)引物(由合肥知恩生物技术有限公司合成);原位末端标记法(TUNEL)细胞凋亡检测试剂盒(购自瑞士罗氏公司,生产批号:11684817910-POD);二喹啉甲酸(BCA)蛋白浓度检测试剂盒(购自博士德生物工程有限公司,生产批号:AR0146);兔抗大鼠AKT、磷酸化(p)-AKT、ERK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2、Bax、β-actin单克隆抗体(一抗),羊抗兔AKT、p-AKT、ERK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2、Bax、β-actin辣根过氧化物酶标记多克隆抗体(二抗)(生产批号:4685S、ab38449、BS6426、ab17942、ab196495、ab53154、ab8227;A0208、QN2742、MBS851214、ALX-810-013-R100、A18415、GOY-D7372、CYB163034) ......