尉建辉,刘虎军

    脑卒中是具有高致残率、致死率的常见脑血管疾病,其中缺血性脑卒中占70%[1]。临床采用物理或药物溶栓、恢复血流供应的方式治疗缺血性脑卒中,但此过程常引发脑缺血/再灌注损伤(CI/RI)。缺血/再灌注损伤发病机制复杂,其中神经细胞氧化应激损伤、细胞凋亡是导致缺血/再灌注损伤的重要原因[2]。因此,抑制神经细胞氧化应激损伤及凋亡有利于减轻缺血/再灌注损伤。桑白皮为桑科植物Morus alba L.的干燥根皮,富含多糖、黄酮类化合物、类固醇、挥发油等多种成分,可泻肺平喘、利水消肿[3]。研究显示,桑白皮多糖可抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡、氧化应激,保护心肌细胞免受氧化损伤,其作用机制与调控circDLGAP4/miR-320轴有关[4]。但还少见桑白皮多糖影响脑缺血/再灌注引起的神经细胞损伤的相关报道。微小RNA(miR)-122是一种在缺血/再灌注损伤大鼠脑组织、缺血再灌注诱导的神经细胞中均表达增加的微小RNA,下调miR-122可通过促进DJ-1基因表达及增强磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路活性抑制神经细胞凋亡,miR-122可作为减轻缺血/再灌注损伤的分子靶点[5]。本研究建立氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)诱导PC12细胞损伤模拟缺血/再灌注损伤,主要探究桑白皮多糖对缺血/再灌注损伤过程中细胞氧化损伤、凋亡的影响及其能否通过调控miR-122发挥作用,以期为缺血/再灌注损伤治疗提供新途径。

    1 材料与方法

    1.1 细胞与试剂

    PC12细胞购自赛百慷(上海)生物技术股份有限公司(批号:20190203);桑白皮多糖购自上海益本生物医药科技有限公司(纯度:≥98%,批号:20190408);胎牛血清(FBS)购自浙江天杭生物科技股份有限公司(批号:20190511);乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒购自南京建成生物工程研究所(批号:20181203,20181118,20181223);DMEM培养液、LipofectamineTM2000试剂盒、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)细胞凋亡试剂盒,北京索莱宝科技有限公司(批号:20190107,20190121,20190123);一抗[活化的半胱天冬酶(Cleaved-Caspase)-3、Cleaved-Caspase-9、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)]、山羊抗兔二抗购自英国Abcam公司(批号:20180911,20181224,20181217);逆转录实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)实验相关试剂盒购自大连宝生物(批号:20190214);引物均由上海生工生物工程股份有限公司合成;转染物均购自广州锐博生物 ......