蔡振璇 张城炼 许卫攀

    摘要目的：分析肿瘤坏死因子受体相关因子5(TRAF5)对缺氧诱导心肌细胞损伤的影响及相关分子机制。方法：体外培养H9c2细胞，以800μmol/L浓度的二氯化钴(CoCl2)处理细胞建立缺氧诱导心肌细胞损伤模型，采用脂质体转染法将TRAF5过表达质粒(pcDNATRAF5)和空载质粒(pcDNANC)转染至缺氧诱导的H9c2细胞。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRTPCR)法检测细胞TRAF5基因表达水平，细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞存活率，流式细胞术检测细胞凋亡率，试剂盒法检测乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)活性及丙二醛(MDA)含量，蛋白免疫印迹(WesternBlot)法检测细胞中TRAF5、细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化ERK(pERK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化p38MAPK(pp38MAPK)、氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK(pJNK)蛋白表达水平。结果：与Control组比较，Hypoxic组H9c2细胞中TRAF5mRNA和蛋白表达水平均降低，细胞存活率降低，细胞凋亡率升高，细胞中LDH水平、MDA含量升高，SOD、GSHPx水平降低，细胞中pERK/ERK、pp38MAPK/p38MAPK、pJNK/JNK比值均升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。与Hypoxic组比较，Hypoxic+pcDNATRAF5组H9c2细胞中TRAF5mRNA和蛋白表达水平均升高，细胞存活率升高，细胞凋亡率降低，细胞中LDH水平、MDA含量降低，SOD、GSHPx水平升高，细胞中pERK/ERK、pp38MAPK/p38MAPK、pJNK/JNK比值均降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：TRAF5通过介导心肌酶活性和氧化应激水平减轻缺氧诱导的心肌细胞损伤 ......