补肾益精方对实验性生精障碍大鼠精子质量及血清NO的影响
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【摘要】 目的:研究补肾益精方对实验生精障碍大鼠精子运动能力及其血清NO的影响。方法：采用皮质酮(CORT)皮下注射造成肾阳虚睾丸生精功能障碍大鼠模型，并予补肾益精汤治疗，观察补肾益精方对实验性生精障碍大鼠精子运动能力及其血清NO的影响。结果：补肾益精方组大鼠的精子数量、精子运动能力及血清NO含量与模型组有显著性差异(P<0.01)。结论：补肾益精方对生精方对生精障碍大鼠有显著的促进生精作用，并可显著提高大鼠精子的质量。
【关键词】补肾益精方；生精障碍；大鼠；精子运动；NO
男性精液质量下降对男性生殖健康产生极大危害，其直接后果是人类生殖能力的下降，这已成为国际社会共同关注的问题。补肾法有调节生殖系统功能的作用，是治疗男性不育症的主要方法之一。补肾益精方是我们临床治疗男性不育少、弱精子症的有效方药，该方由淫羊藿、山茱萸、菟丝子等组成，具有补肾生精之功效。本研究进一步观察其对实验生精障碍大鼠精子运动能力及其血清NO的影响。
1材料与方法
1.1补肾益精方的制备中药饮片经粉碎后过30目筛，按补肾益精方之组成准确秤取各药材，加药材质量5倍的去离水，浸1h，沸水煎煮60min，冷却，4000r·min离心30min，留上清液，沉渣再煎煮60min，共煎煮3次。合并上清液，60℃浓缩，制备成每毫升2.0g生药。冷藏，备用。
1.2动物雄性SD大鼠，由上海西普尔—必凯实验动物有限公司提供，合格证号：04535。
1.3皮质酮诱发的肾阳虚睾丸功能损害大鼠模型
取90天龄的正常雄性SD大鼠，体重290~300g。随机分为3组，每组10只。①模型组：造模作治疗前观察，同时以蒸馏水代替药物灌胃，与中药治疗组进行同步观察。②中药治疗组：造模后服中药治疗，予补肾益精方按2.0g/kg灌胃给药，2次/d，连续45天。③正常组：以等体积灭菌豆油代替皮质酮及蒸馏水代替药物灌胃。造模方法：以皮质酮(CORT)10mg/kg体重皮下注射，每天一次，连续14天。
1.4计算机辅助附睾丸精子运动CASA分析及NO测定解剖剥取附尾浆液，分别加入精子稀释液和BWW营养液试管中，参照人类精液常规分析方法，做精子分析检测[1]。给药45天后，予心脏采血(无菌操作)，分离血清测定NO。NO测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供，严格按操作说明书进行操作。
1.5统计学分析组间比较应用SPSS10.0版统计软件进行t检验和方差分析。
2结果
2.1补肾益精方对大鼠附睾精子质量的影响
治疗后，附睾尾精子的密度、活动率、活动力和直线运动情况见表1。造模组精子质量各项指标较空白组均有下降，其中精子密度、活动率和活动力比较有显著差异(P<0.01)。补肾益精方治疗后，精子质量有不同程度的提高。
2.2补肾益精方对大鼠血清NO的影响
治疗后大鼠血清NO水平见表2。模型组的NO浓度与空白组、治疗组有显著性差异(P<0.01)，表明补肾益精方可升高造模大鼠的NO水平。结果表明，实验性生精障碍大鼠模型给予补肾益精方可升高造模大鼠的NO水平。结果表明，实验性生精障碍大鼠模型给予补肾益精方治疗，大鼠精子数量的提高与NO水平的升高密切相关。
3讨论
补肾是中医治疗男性不育的一个重要方法，历代医家重视从补肾论治男性不育症。现代医学认为，生殖系统的生长发育受内分泌系统所支配，肾本质的研究，证实了中医的肾类似下丘脑-垂体-性腺轴的作用。
间质细胞(Leydig cell)是雄性哺乳动物机体内合成、分泌睾酮的最主要细胞，90%以上的睾酮由Leydig细胞分泌，其余的由肾上腺皮质网状带细胞分泌的去氢异雄酮、雄烯二酮转化。关于糖皮质激素(大鼠体内是皮质酮)抑制睾酮合成机理，近年来认为是经糖皮质激素介导的对间质细胞直接作用的过程，其结果可能导致LH受体表达减少，及睾酮生物合成中一个或几个酶活性下降[2-4]。11β-羟类固醇脱氢酶(11β-HSD)是一种和糖皮质激素代谢有关的酶。该酶广泛地分布在哺乳动物各组织中，但各组织中该酶的活性差异很大，其中肝脏、肾脏、睾丸中此酶的活性最高。免疫组织化学分析证实，在睾丸中11β-HSD仅存在于间质细胞中。Leydig细胞中11β-HSD通过氧化灭活糖皮质激素，控制其在细胞的浓度，以此调节糖皮质激素对睾酮合成的抑制作用。
研究发现NO在男性生殖系统功能的调节方面具有重要作用，NO在低浓度时显著促进精子运动，中等浓度时影响甚微，而高浓度时则明显抑制精子的运动[5]。Valenti等[6]用NO供体对鼠进行实验后发现，NO在低浓度时可以通过cGMP介导作用刺激睾酮的分泌，而在高浓度时又可以通过cGMP介导作用抑制睾酮的分泌，可见NO在精子的发生过程中具有重要的调节作用。
本实验结果表明补肾益精方可显著地促进生精障碍大鼠的生精作用，显著地提高精子的质量及血清NO水平。本研究表明了补肾益精方对精子运动功能的有利影响，为补肾益精方治疗少、弱精子的男性不育症提供了实验依据。
(参考文献略), http://www.100md.com(邓平荟 曾金雄 王如瑶)