Y染色体微缺失与精子发生的相关性分析(2)
1. 3 PCR
1.3.1 DNA提取 根据外周血基因组DNA提取盒的说明,提取人外周血基因组DNA。取500μl抗凝静脉血,用酚/氯仿/异戊醇抽提,最后用乙醇沉淀,-20℃保存备用。
1.3.2 PCR扩增 25μl体系,包括10×buffer 2.5μl,25 mmol/L MgCl2 1.5μl,10 mmol/L dNTP 2.5μl,DNA 3μl(50-100ng),引物混合物A或B 2μl,蒸馏水13μl和Taq DNA聚合酶0.5μl。PCR反应条件为:95℃ 5min预变性;95℃ 30s,50℃ 30s,72℃ 30s,共35个循环;72℃延伸10min。PCR产物4℃保存。每份标本重复PCR一次。
1.3.3 电泳检测及结果判断 取PCR产物8μl加入1.5μl 6×上样缓冲液(含EB的替代染料subgreen),混匀后点样于3.0 g/L琼脂糖凝胶,6V/cm电泳30min。用DL2000 Marker作为参照。结果判断:如果与正常对照组相比出现一个或多个STS条带丢失,即可判断为其对应的STS缺失。每份标本重复PCR、电泳一次。
2 结 果
病人资料利用单因素方差分析,各组在年龄上没有统计学差异 ......
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