解脲支原体造模问题探讨

http://www.100md.com 2012年3月1日 《中国性科学》 2012年第3期

     [摘要]目的：采用阴道注入菌液的方法观察雌性大、小鼠阴道解脲支原体定植的成功率。方法：每周给大、小鼠分别皮下注射雌二醇一次，在第二次注射雌二醇后分别给予阴道注入解脲支原体菌液，在第四周和第五周取其阴道分泌物进行支原体鉴定实验，计算大、小鼠各自的定植成功率并行统计分析。结果：小鼠的定植成功率明显高于大鼠，据统计学分析P<0.05，说明大、小鼠两组间比较有显著差异。结论：若采用阴道注入菌液的方法，小鼠比大鼠更容易造模成功。

    [关键词]解脲支原体；造模

    解脲支原体(Ureaplasma urealyticum UU)目前被认为是引起非淋菌性尿道炎、男性不育、女性不孕及盆腔炎等多种疾病的主要病原体。关于支原体的各种研究也随之越来越多。解脲支原体模型的顺利建立将为以后的各种研究奠定良好的基础。以前最经典的模型是Taylor-Robinson等建立的以BALB/C小鼠为载体的UU感染模型，据查阅文献得知国内现在有不少采用大鼠膀胱内注射菌液的造模方法，或者是BALB/C小鼠模型，很少见到无创性的大鼠模型。本实验采用阴道接种菌液的方法为大鼠、小鼠同时造模，观察各自的造模结果，以探索出新的解脲支原体的造模方法，这将对以后的研究有重要意义。

    1 实验材料

    1.1 实验菌株

    UU血清8型(ATCC27816)，由北京中原合聚公司代购自ATCC(美国模式培养物集存库)，复苏并传代后备用。

    1.2 实验动物

    SD大鼠14只，BALB/C小鼠14只，来源于北京维通利华实验动物技术有限公司。鼠龄8～10周，大鼠体重在180～200g，小鼠体重在16～18g，清洁级，饲养于北京中医药大学东方医院实验中心动物实验室。

    1.3 试剂

    苯甲酸雌二醇，购自天津金耀氨基酸有限公司；解脲支原体液体培养基，购自珠海丽珠试剂有限公司。

    2 实验方法

    2.1 动物分组

    实验动物送到饲养室后需先进行解脲支原体测试，阴性者方可进行实验。将检测均为阴性的SD大鼠14只随机分成2组，即：A组7只，连续接种3次菌液；B组7只，连续接种3次菌液后一周再补种一次同等量菌液；BALB/C小鼠分组方法同SD大鼠，即a组、b组。分好组后让其适应环境一周。

    2.2 菌液制备

    将来自ATCC的解脲支原体血清8型冻干菌株用液体培养基1ml溶解稀释，在37℃条件下培养大约24h，培养基颜色由黄变浅粉色即复苏成功，然后传代，传至第三代时配制成10⁵ccu/ml的浓度备用。

    2.3 雌二醇处理

    每周在大、小鼠的皮下注射一次苯甲酸雌二醇注射液，大鼠注射0.5ml，小鼠注射0.2ml，共4次。

    2.4 菌液接种

    在第二次注射雌二醇后，即往阴道接种解脲支原体菌液，大鼠50ul，小鼠20ul，连续接种3次。大鼠B组和小鼠b组在接种3次后一周再补种1次。

    2.5 检测

    第四次注射完雌二醇后，用男用阴拭子采取大、小鼠阴道分泌物，放入解脲支原体鉴别培养基中在37℃条件下培养，若培养基颜色变红即表明支原体检测阳性。

    3 实验结果

    3.1 动物的一般情况

    大鼠在注射雌二醇后表现较前兴奋，进食较前增多，其他情况较注射和接种前无明显变化。小鼠注射雌二醇后亦比注射前兴奋，接种菌液后第一周精神开始萎靡不振，毛发失去光泽，进食减少。大、小鼠阴道口周围均无明显变化。

    3.2 支原体检测

    大鼠A组和小鼠a组在第四次注射雌二醇后，有男用阴拭子取大鼠阴道分泌物；大鼠B组和小鼠b组在补种一次菌液后，采取阴道分泌物检测。发现大鼠阴道分泌物未见明显增多，小鼠阴道分泌物增多明显。培养基检测结果显示，A组有0只感染，B组2只感染；a组和b组7只全部感染。见表1、表2。

    3.3 统计学处理

    用Fisher's检验P<0.05，说明大鼠、小鼠两组间比较有显著差异，有统计学意义。见表3。

    4 结论

    从本实验的观察结果可得出结论，BALB/C小鼠阴道接种解脲支原体造模成功率达100%，大鼠阴道接种解脲支原体造模成功率只有28.6%，应用统计学分析得出P<0.05，表明两组有显著差异具有统计学意义。小鼠容易成功的关键，我们考虑在于BALB/C小鼠是近交系小鼠，有免疫缺陷，使之易于感染。而SD大鼠是健康的没有免疫缺陷的，因此不容易感染。但是小鼠有着体型小，各个器官也小，会出现取材不方便及标本量不够等情况，大鼠则可以解决这些问题，但目前的大鼠造模方法是开腹有创型的，这样会增加死亡率，而且操作复杂。我们要探索无创型造模方式。本次实验结果显示我们在补种后大鼠成功率由0%升至28.6%，表明阴道接种这种造模方式改进后还是有可能用于大鼠造模。此次造模的不成功可以考虑接种菌液的次数不够，或者菌液浓度不足，再或者注射的雌二醇的量不足难以诱导出解脲支原体易感状态，这需要后续的实验进行证实。总之，本实验为以后进一步的研究提供了有力的依据。

    参考文献

    1 王骷，陆承荣，等，解脲支原体大鼠感染模型的建立[J]，实验动物科学，2011，28(2)：74

    2 刘朝晖，廖秦平，盆腔炎性疾病致病微生物及治疗方案研究[J]，实用妇产科杂志，2010，26(7)：522-524

    3 Taylor—robinson D，Fun"PM，Observations on experimental colon-isation of mice by ureaplasmas of human origin[J]，MedMicrobiol,2002，51：866-870(孙源梅 李元文 张颖纯等)

    百拇医药网 http://www.100md.com/html/paper/1672-1993/2012/03/09.htm