利用噬菌体多肽库筛选卵巢癌细胞特异性结合肽(2)
1.2.6细胞免疫荧光如“细胞免疫染色”中所述制作细胞爬片，固定，封闭，加入1∶100稀释的抗M13抗体，37℃孵育2 h；加入1∶300稀释的FITC标记的兔抗鼠IgG，37℃ 孵育0.5 h(避光)；加入DAPI(1：5000)常温孵育5 min(避光)；立即在荧光显微镜下观察。
1.2.7合成多肽的竞争抑制实验收集HO-8910细悬液，调整细胞数为1×107/mL；分别将HO-8910细胞与不同浓度的多肽NPMIRRQ或对照肽4℃孵育0.5 h，再与109 pfu噬菌体NPMIRRQ于4℃孵育2 h(旋转，30 rpm/min)；后离心、复苏、测滴度。实验共分为7组，多肽浓度分别是：0 μmol/L、0.01 μmol/L、0.1 μmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L、100 μmol/L和500 μmol/L，以多肽浓度是0 μmol/L时的噬菌体滴度为100%，计算不同浓度多肽时噬菌体滴度的相对比值。多肽NPMIRRQ和对照肽均由上海生工公司合成。
2实验结果
2.1差减筛选
本文用CHO、HO-8910作为吸附细胞及靶细胞 ......
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1.2.7合成多肽的竞争抑制实验收集HO-8910细悬液，调整细胞数为1×107/mL；分别将HO-8910细胞与不同浓度的多肽NPMIRRQ或对照肽4℃孵育0.5 h，再与109 pfu噬菌体NPMIRRQ于4℃孵育2 h(旋转，30 rpm/min)；后离心、复苏、测滴度。实验共分为7组，多肽浓度分别是：0 μmol/L、0.01 μmol/L、0.1 μmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L、100 μmol/L和500 μmol/L，以多肽浓度是0 μmol/L时的噬菌体滴度为100%，计算不同浓度多肽时噬菌体滴度的相对比值。多肽NPMIRRQ和对照肽均由上海生工公司合成。
2实验结果
2.1差减筛选
本文用CHO、HO-8910作为吸附细胞及靶细胞 ......
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