吕莹，郝尧坤，张照兰(河南中医药大学第一附属医院 脾胃肝胆病科，郑州 450000)

    细胞凋亡是程序性细胞死亡，具有坏死的生化和形态学特征，细胞凋亡不仅可能导致细胞死亡，而且在导致受损组织的级联反应中起重要作用[1]。肝细胞凋亡是肝脏疾病的重要影响因素，并参与正常肝细胞的发育和控制肝脏疾病的发展[2]。槲皮苷(quercitrin)，即槲皮素-3-鼠李糖苷，具有较强的抗氧化作用，是一种遍布植物体内的生物大分子，为侧柏[3]、鱼腥草[4]、桑寄生[5]等传统中药材的主要药物成分，其药效作用备受人们的重视。近几年研究发现槲皮苷发挥多种生物学作用，包括抗肿瘤[6]、抑制破骨细胞形成[7]、保护血管内皮细胞[8]、促进牙周再生[9]、抑制巨噬细胞炎症[10]等。本实验采用过氧化氢(H2O2)处理肝细胞损伤进行体外实验研究，观察槲皮苷对肝细胞L-02 损伤的保护作用和抗凋亡机制。

    1 材料

    正常人肝细胞L-02(中国科学院上海细胞生物学研究所)，槲皮苷(纯度≥98%)、7'-dichloroflurescin diacetate(DCFH-DA)试剂盒(美国Sigma-Aldrich 公司)，噻唑蓝(MTT)(货号：M2128)、二甲基亚砜(DMSO)、DMEM 培养基、胎牛血清(美国GIBCO 公司)，异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(Annexin Ⅴ-FITC/PI)细胞凋亡检测试剂盒(货号：KGA108)(江苏凯基生物公司)，核转录因子E2 相关因子(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、B 细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2 相关X 蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase-3)抗体(美国Cellular Signaling Technology 公司)，辣根过氧化物酶标记二抗(北京中杉金桥有限公司)，TNF-α(货号：E-EL-H0109c)、IL-6(货号：E-ELH0102c)酶联免疫(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA)试剂盒(武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司)，超氧化物歧化酶(SOD)(货号：S0109)、丙二醛(MDA)(货号：S0131)检测试剂盒(碧云天生物技术公司)。

    2 方法

    2.1 L-02 细胞培养与分组

    L-02 细胞中加入含10%胎牛血清的DMEM培养基，置于37℃、5%CO2的培养箱中常规培养。将生长状态良好的L-02 细胞分为空白组：正常培养的L-02 细胞；H2O2组：使用0.6 mmol·L-1H2O2处理1 h；槲皮苷处理组：L-02细胞分别使用25、50、100、200、400、800、1600、3200 μmol·L-1槲皮苷预处理3 h 后 ......