康秉文，陈蓉，殷草草，石莹，王玥，刘启玲，秦绪军*(.陕西中医药大学 公共卫生学院，陕西咸阳 7046；.西北大学 生命科学学院，西安 70069)

    血管自身的衰老是导致心血管疾病高死亡率的重要危险因素之一，它影响了心血管疾病的发病过程以及严重程度[1-2]。血管内皮细胞是血管壁的重要组成部分，与血液的成分直接接触。随着年龄的增长，血管内皮细胞易受血流中异常成分等因素的影响，诱发氧化应激，进一步导致血管内皮细胞衰老。表现为细胞增殖减少，G0/G1期停滞，细胞迁移受阻以及内皮功能障碍等。越来越多的研究结果表明内皮细胞衰老是血管衰老发展过程的关键步骤[3-4]。因此揭示内皮细胞衰老机制可以为预防和治疗心血管疾病提供依据。

    环境因素能够影响内皮细胞的衰老，但具体机制仍然不清楚[5-6]。氧化应激通过产生大量活性氧(ROS)在诱导内皮细胞衰老以及血管衰老的过程中具有重要作用[7]。ROS 能够诱导DNA 损伤、导致炎症反应、细胞衰老以及凋亡[8]。虽然低剂量ROS 对于维持细胞内环境稳态以及适应应激反应是有益的，但是，过度的ROS 产生会导致细胞损伤甚至死亡[9]。线粒体是细胞ROS 产生的主要来源，细胞内90%以上的ROS 来源于线粒体的氧化磷酸化。线粒体通过产生三磷酸腺苷(ATP)以及其他代谢产物在细胞增殖、迁移、凋亡、免疫反应以及基因表达中都发挥了重要作用[10-11]。因此，线粒体功能对于维持细胞正常功能以及内环境稳态都至关重要。有研究发现，线粒体功能损伤引起的线粒体ROS(mtROS)产生增加或抗氧化防御体系的降低可以促进细胞衰老，比如敲除线粒体抗氧化酶SOD2 会使mtROS 增加并伴有血管功能的损伤，而mtROS 的增加也会使氧化应激增强，进而导致细胞衰老[12-13]。

    尿石素A(UA)是于石榴、草莓以及其他的坚果中主要成分——鞣花单宁和鞣花酸的一种代谢产物。研究发现，UA 通过诱导线粒体自噬延长线虫寿命[14]，通过缓解氧化应激抑制巨噬细胞中炎症因子的产生[14]。有研究发现，UA 能够缓解D-半乳糖诱导的小鼠大脑的衰老[15]。这些研究提示，UA 具有抗炎、抗氧化、调节自噬以及抗衰老等作用。为进一步明确UA 的抗衰老作用，并且探讨其中的内在机制，本研究观察了UA 对血管内皮细胞衰老的影响及其抗氧化机制。

    1 材料

    HUVEC 细胞(中科院上海细胞库)；UA(上海陶素生化科技有限公司，纯度≥98%)；胎牛血清(Fetal Bovine Serum，FBS)、DMEM高糖培养基(Gibco)；蛋白定量分析试剂盒(Thermo)；DCFH-DA 荧光探针(Sigma)；过氧化氢酶(CAT)活性试剂盒、总SOD 活性试剂盒、SA-β-gal 染色试剂盒(碧云天生物技术研究所)；CCK-8 试剂盒(汉恒生物)；丙二醛(MDA)试剂盒(江苏凯基生物技术股份有限公司)；Actin、SOD2 鼠抗单克隆抗体(Santa Cruz)；总RNA 提取试剂盒(天根生化科技有限公司)；β-gal活性试剂盒、MitoSOX 荧光染料、二氧化碳孵育箱(Thermo)；细胞凋亡线粒体膜电位(JC-1)检测试剂盒(江苏凯基)；CKX41 倒置显微镜(日本Olympus)；Infinite200 PRO 全波长多功能酶标仪(Tecan)；流式细胞仪(BD)；Trans Blot Turbo 蛋白转印系统、蛋白电泳仪、凝胶成像系统(Bio-Rad)；BX43 荧光显微镜(Olympus) ......