相亚楠，高尤，冯健男，张文鹏*，庄笑梅*(1.天津大学，天津 30007；.军事医学研究院，北京 100850)

    埃博拉病毒(EBOV，Ebola virus)作为烈性病毒属于丝状病毒科[1]，可引起人类和灵长类动物产生埃博拉病毒病，具有潜伏期长、传播途径广、感染种群复杂、毒性大和致死率高等特点[2-5]。

    自2014年西非埃博拉疫情爆发以来，基于“同情性用药”原则，在紧急状态下ZMapp 被批准用于埃博拉出血热患者的治疗。ZMapp 由c2G4、c4G7 和c13C6 共3 个嵌合抗体组成[6]，它们的母本抗体均是从免疫小鼠中筛选获得，经嵌合改造将ZMapp 恒定区替换为人IgG1 的Fc[7-12]，分别识别EBOV 表面的GP-1 蛋白、GP2 蛋白和sGP 蛋白。通过阻断EBOV 病毒表面抗原与宿主细胞表面受体相互作用，介导抗体依赖细胞介导的细胞毒效应等免疫效应，发挥其抗病毒作用。

    MBS77E 是军事医学研究院在ZMapp 的c13C6和c2G4 抗体基础上改造的双特异性抗体，通过工程化改造的中国仓鼠卵巢细胞表达而来，并且将两个抗体融合成一个分子，便于生产、给药方便，MBS77E 体内真病毒攻毒实验结果优于ZMapp[13]。该抗体抗病毒效果良好，已进入临床前研究。目前针对生物基质中抗体药物的定量检测方法有同位素示踪法、ELISA 法、HPLC 法和LC-MS/MS 法。同位素示踪法实验过程繁琐，且同位素的使用有较严格的要求；HPLC 法适用于制剂产品分析，用于生物样品分析时，灵敏度和选择性都不够；LC-MS/MS 法的条件优化过程复杂，且费用昂贵[14-17]。

    本研究拟建立特异、敏感、简便、高通量、重复性好的间接 ELISA 法定量测定大鼠血清中MBS77E，并对其在大鼠体内药代动力学进行研究。

    1 材料

    1.1 试药与仪器

    MBS77E 单克隆抗体(浙江海正药业，质量浓度4.5 mg·mL-1，批号：190410)；大鼠空白血清(北京维通利华实验动物技术有限公司，批号：190825)；GP-1 蛋白(军事医学研究院，质量浓度2.2 mg·mL-1，批号：190410)；羊抗人IgGHRP(Sera care 公司，货号：5220-0330)；TMB 显色液(四甲基联苯胺，Invitrogen 公司，货号：00-4201-56)；包被缓冲液(pH 9.6 碳酸盐缓冲液，自制)；洗涤液(pH 7.4 的PBST 溶液，自制)；磷酸盐缓冲液(PBS ......