石镇港，夏伟，刘学武，冯璐瑶，冯超，赵丞，姜德建，信红亚(1.湖南省中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地，长沙 41008；.湖南省药物安全评价研究中心，新药药效与安全评价湖南省重点实验室，长沙 410331；3.中南大学湘雅医院血液科，长沙 410008)

    真性红细胞增多症(polycythemia vera，PV)是一种Ph 阴性骨髓增生性肿瘤疾病，其全球性群体发病率为8.4×10-6[1]。PV 的主要特征为二系或三系骨髓细胞过度增殖，临床表现为以红细胞计数升高为主的二系或三系血细胞计数升高，通常伴有肝脾肿大、出血与血栓形成，末期可进展为骨髓纤维化疾病[2]。随着JAK2V617F基因突变的发现，研究者对PV 的发病机制有了更深的了解，目前PV 患者中约95%存在JAK2V617F或JAK2外显子12 号基因突变[3-4]。现阶段研究人员主要是通过转基因、基因敲入或注射转染JAK2V617F突变基因细胞等方法构建JAK2V617F突变的PV 疾病动物模型[5-8]。与注射转染JAK2V617F突变基因细胞方法相比，转基因及基因敲入建立PV 模型存在耗时长、成本较高等缺点，因此本研究采用尾静脉注射JAK2V617F突变细胞，构建BALB/c 小鼠PV 模型，模拟PV 全身播散的生物学特点，探讨PV 模型建立方法以及细胞量对PV 动物模型建立的影响，为今后研究PV 治疗提供模型基础。

    1 材料

    1.1 实验动物及预处理

    SPF 级BALB/c小鼠40只，雌性，5 ～6 周龄[湖南斯莱克景达实验动物有限公司，实验动物生产许可证号：SCXK(湘)2011-0003；饲养于湖南省药物安全评价研究中心屏障环境，实验动物使用许可证号：SYXK(湘)2015-0016]。所购小鼠于SPF 级动物房内常规饲养1 周，标准颗粒饲养，饮水、垫料及一切与鼠接触的物品均经灭菌处理。接种前动物接受1.0 Gay 剂量的全身辐照，预处理后24 h 内尾静脉接种细胞。

    1.2 试药与仪器

    BA/F3 完全培养基、BA/F3 细胞(上海复祥生物科技有限公司)；JAK2V617F质粒(载体为pCDH-CMV-MCS-COpGFP-T2A-Puro)、空白载体质粒及慢病毒(武汉中迈盈科生物科技有限公司构建并包装)；磷酸芦可替尼片(AG，规格：5 mg/片，批号：SCU66)；BC-5800 型五分类血液细胞分析仪(深圳迈瑞公司)；ME2002E 型电子天平[梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司]；RM2235 型石蜡切片机、TP1020 型全自动脱水机、ED1150H +C 型组织包埋机、DFC420C 病理成像系统、DM2000 型生物显微镜(德国Leica 公司) ......