基于高效液相色谱法结合层次分析和正交设计法优选土茯苓醇提工艺
新异,新妇,1仪器与试药,2试药,2方法与结果,1提取液的制备,23种提取方法的提取得率,3HPLC法同时测定5种指标成分,4AHP确定各指标权重系数,5超声提取方法的单因素试验,6正交试验设计,7
黄诗淇,武正华,缪文清,周利娟,石文清,范国荣*(.广西中医药大学药学院,南宁 53000;.上海交通大学附属第一人民医院临床药学科,上海 00080)土茯苓为百合科植物光叶菝葜(Smilax glabraRoxb)的干燥根茎。性平,味甘淡,归肝胃脾经,具有清热除湿、解毒、通利关节等功效[1-3]。据文献报道[4-5],土茯苓不仅可以通过抑制肝脏中黄嘌呤氢化酶(XDH)mRNA 和黄嘌呤氧化酶(XOD)的活性来达到降尿酸的作用,还可以通过下调血清中尿酸和肌酐的水平,对高尿酸血症小鼠起到治疗作用。张白嘉等[6]发现土茯苓对二甲苯所致小鼠耳肿胀、蛋清及角叉菜胶所致小鼠足肿胀均有明显抑制作用;落新妇苷对尿酸钠所致大鼠痛风性关节炎有治疗作用,同时可明显增加大鼠的尿量;对醋酸所致小鼠扭体反应有明显的抑制作用;以及对热板法引起的小鼠足痛有对抗作用,证实了土茯苓及落新妇苷具有抗炎、镇痛、利尿等作用。
土茯苓含多种化学成分,包括糖、有机酸、苯丙素、黄酮及黄酮苷、甾醇、皂苷和挥发油等[3]。目前对土茯苓化学成分的研究主要集中在黄酮类物质。其中黄杞苷作为土茯苓中重要的活性成分;落新妇苷作为土茯苓的指标性成分,具有热不稳定性,提取过程中不可避免地会分解生成新落新妇苷、异落新妇苷和新异落新妇苷3 种同分异构体,上述5 种化学成分均属于二氢黄酮醇类物质。但是这5 种化学成分的含量在不同的提取工艺下又有显著的差异,因此,优化土茯苓中二氢黄酮醇类物质的提取工艺是十分有必要的。通过查阅土茯苓提取工艺的相关文献[7-14],已报道的提取方法多是对土茯苓中单一的黄酮类物质的含量或者土茯苓总黄酮的含量进行评价来确定提取工艺,鲜有对土茯苓中二氢黄酮醇类化合物进行多指标的综合评价。中药提取工艺若仅以单一化学成分的含量高低或有效部位的含量高低来评价工艺的优劣,则会忽略多组分之间的协同或相互作用,因此,以多种化学成分的含量作为评价指标更有助于综合评价土茯苓的提取工艺[15]。
本试验通过选取提取时间、固液比、乙醇浓度为考察因素,以落新妇苷、新落新妇苷、异落新妇苷、新异落新妇苷、黄杞苷5 种二氢黄酮醇类成分的含量为评价指标。采用HPLC 法测定5 种指标成分的含量,通过正交试验设计优选出最佳的乙醇提取工艺,同时结合层次分析法(analytic hierarchy process,AHP)建立指标回归模型,确定各指标权重系数,以多指标综合评分法对提取方法进行综合全面的评价。以期为土茯苓的资源开发、工业化生产以及新药研发提供理论依据,为中药材提取工艺的研究提供参考。
1 仪器与试药 ......
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