基于转录组学的芍药内酯苷抗肝癌的作用机制研究
差异基因,货号,1材料,1试药及细胞,2仪器,2方法,1溶液的配制,2细胞培养,3CCK8法检测细胞活性,4细胞侵袭实验,5总RNA提取,6转录组测序,7测序数据处理,3结果,1抗肝癌活性,2细胞侵袭实验,3测序数
周雅婷,罗志强,张彬彬,王武斌,孙睿,于国华*,史渊源,2*(.北京中医药大学生命科学学院,北京 02488;2.深圳北京中医药大学研究院,深圳 588)肝癌是全球癌症诊出率排第六的癌症,西医疗法是治疗肝癌的主要策略(如手术切除、肝移植、射频、化疗和靶向分子治疗),但肝癌患者的一般预后仍然不佳[1]。中医学认为,癌症由痰浊、气滞、血瘀等病理产物与乖戾之气相合,郁积化为癌毒,邪盛正虚所致。临床治法强调肝脾同调,疗效肯定[2]。白芍在中医理论中归肝经,具有平肝止痛、养血调经、敛阴止汗等功效,其靶器官很可能在肝脏。实验研究表明白芍有抑制肿瘤生长[3]、逆转肿瘤耐药[4]、影响肝癌预后[5]、抑制细胞迁移和侵袭[6]等作用。但相关研究多集中于中药复方或者单味中药,中药药物成分复杂,有多靶点多通路作用的特点,对独立药物成分抗肿瘤作用的研究可以有助于更好地解释药物作用的分子机制、指导临床应用和新药研发。本研究选取肝癌治疗常用药白芍[7]的主要化学成分——芍药内酯苷[8]进行体外实验及转录组学研究,进一步探索其抗肝癌作用的生物学机制,为临床用药及新药研发提供参考。
1 材料
1.1 试药及细胞
芍药内酯苷(赛谱锐思科技有限公司,货号:B21149-20 mg);CCK8试剂盒(北京兰博利德商贸有限公司,货号:ceb044hu);Gibco澳洲胎牛血清(FBS,英潍捷基贸易有限公司,货号:10099141C);Corning-Cellgro RMPI 1640培养基(货号:10-040-CVR)、Corning-Cellgro 0.25%EDTA胰蛋白酶(货号:25-053-CI)(北京拜尔迪生物技术有限公司);Gibco青链霉素双抗(P/S,北京欧北生物科技有限公司,货号:15140122);PBS干粉(北京百诺威生物科技有限公司,货号:p1010);Qiagen RNA提取试剂盒RNeasy Mini Kit(上海优宁维生物科技股份有限公司,货号:74104);Illumina TruSeqTM RNA sample preparation Kit(货号:RS-122-2001)、Invitrogen SuperScript double-stranded cDNA synthesis Kit(货号:11917020)(上海美吉生物医药科技有限公司)。HepG2细胞系(北京协和医学院)。
1.2 仪器
光学普通倒置显微镜(日本Olympus CKX53);光学正倒置一体显微镜(日本ECHO RVL-100);CO2恒温培养箱160i(美国Thermo Scientific);酶标仪(美国Molecular Devices SpectraMax i3X);紫外分光光度计(美国Thermo NanoDrop One);高通量测序平台(美国Illumina Novaseq 6000);电泳仪(中国六一DYCP-32B);生物芯片分析仪(美国Agilent 2100) ......
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