马妍，吴丹，张伟，梁嘉钰，李斌(.天津中医药大学第二附属医院，天津 30050；.天津中医药大学，天津 3067)

    目前，中风已成为成人致残的首要原因，是仅次于冠心病的全球第二大致死原因，其中缺血性卒中约占80%[1]。中医药对缺血性中风的治疗效果肯定[2]，脑心通胶囊作为上市多年的中成药，由黄芪、赤芍、丹参、当归、川芎、桃仁、红花、乳香(制)、没药(制)、鸡血藤、牛膝、桂枝、桑枝、地龙、全蝎、水蛭等16 味药组成，其可益气活血、化瘀通络，用于气虚血瘀、脉络瘀阻所致中风、冠心病等。脑心通具有抑制炎症因子释放、抗氧化及凋亡、神经保护等作用[3]，关于脑心通胶囊治疗中风方面研究目前集中在临床和动物方面，其体外及深入机制研究较少。

    脑缺血后神经损伤的机制，除神经元缺血缺氧后Na+-K+-ATP 酶活性降低，细胞去极化，释放兴奋性氨基酸，引发兴奋性氨基酸受体介导的Na+和Ca2+内流外，非谷氨酸机制在脑缺血后离子失衡及细胞死亡中也起到了相当重要的作用[4]，如瞬时受体电位通道(TRP)[5-6]、酸敏感离子通道(ASICs)[7]等。其中TRPM 是一种非特异性阳离子通道，其成员TRPM2 和TRPM7 在脑缺血过程中与Ca2+失衡导致的细胞损伤甚至细胞死亡关系密切[8]。随着缺氧时间延长，谷氨酸释放造成的Ca2+浓度升高不再是主要原因，而TRPM7 成为Ca2+内流的主要通道，其开放与一氧化氮(NO)介导的活性氧(ROS)大量生成有关[9]。

    基于以上研究现状，本研究以原代培养大脑皮层神经元为研究对象，建立氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation，OGD/R)损伤模型，由于中药复方用于离体实验存在诸多问题，本研究采用脑脊液药理学的给药方法，观察脑心通的神经保护作用以及对TRPM7的影响，以期为脑心通治疗缺血性脑卒中提供实验依据。

    1 材料

    1.1 动物

    Wistar 大鼠，体质量(180±20)g [天津中医药大学实验动物中心，SCXK(津)2009-0004]；大耳白家兔，体质量(2±0.2)kg [天津市工程所实验动物中心，SCXK(津)2010-0002]。

    1.2 试药

    DMEM/F12 培养基、DMEM 无糖培养基、B-27、胰酶(不含EDTA)、D-hank’s 溶液(美国Gibco)；胎牛血清、青霉素/链霉素、PBS 溶液(美国Hyclone)；DAPI 溶液(即用型)、多聚赖氨酸(索来宝)；微管相关蛋白2(MAP2)-抗(兔源)、Anti-rabbit IgG(H +L)、F(ab)2Fragment(Alexa Fluor.488Conjugate)(美国CST)；Triton X-100、DSMO(美国Sigma)；CCK-8 检测试剂盒(日本同仁化学研究所)；LDH 检测试剂盒(南京建成公司)；Trizol(美国Invitrogen)；反转录第一链cDNA 合成试剂盒、FastStart Universal SYBR Green Master(Rox)(瑞士Roche)；脑心通胶囊超微粉(陕西步长集团 ......