许娜，彭婷，罗志勇，邹自征，马大友，刘苏友，刘丽君*(.中南大学湘雅药学院，长沙4003；.中南大学生命科学学院，长沙 4003)

    天然产物及其衍生物是发现新药的重要来源[1]，很多天然产物具有良好的抗肿瘤活性，可以直接作为抗肿瘤药物或先导化合物。多杀菌素(spinosyn) 是刺糖多胞菌Saccharopolys poraspinosa发酵液中提取的大环内酯类化合物。它是一种新型的生物源广谱绿色低毒杀虫剂，于20世纪90年代初期开发并推向市场[2]。研究显示，多杀菌素还能够抑制细菌和病毒感染，促进伤口愈合，同时对多种肿瘤细胞有抑制活性[3]。多杀菌素A(spinosyn A，见图1)是其主要成分，它不仅生物活性高，而且对非靶标生物的毒性很低[4]。多杀菌素在抗肿瘤药物研究领域结构新颖，但是其抗肿瘤作用机制仍不明确，值得进一步研究。

    小分子探针是确定活性化合物生物靶点的重要工具，其中生物素标记探针是发现活性天然产物靶点蛋白的有效手段[5-8]。生物素标记探针主要由三部分组成，分别是生物素、连接基团和活性基团[9]。连接基团是将活性基团和生物素连接起来的长链或短链结构，它的结构会影响到探针的生物活性和稳定性[10]。连接基团的主要功能是调节生物素和活性基团的空间距离，避免生物素和活性基团的空间干扰。常用的连接基团有长链脂肪烷烃[11]、多肽片段[12]或乙二醇[13]等。

    为了研究多杀菌素衍生物的抗肿瘤作用机制，本试验设计并合成带有生物素标记的多杀菌素衍生物，来研究其体外抗肿瘤活性。

    1 材料

    D-生物素(上海瑞永生物科技有限公司，纯度≥99%)；氯乙酰氯、1，3-二溴丙烷、1，6-二溴己烷(萨恩化学技术有限公司，纯度均为98%)；其他试剂均为市售分析纯或化学纯。Bruker DRX型核磁共振仪(400 MHz，500 MHz)；X-4 型数字显微熔点仪；安捷伦6200/6500 series Q-TOF MS(HR-ESI-MS)型质谱仪。多杀菌素A 按文献方法由多杀菌素甲醇重结晶得到，纯度大于95%[14]。

    2 方法与结果

    本研究在多杀菌素A 的福乐糖胺氮原子上引入含有不同连接基团的生物素，合成生物素标记的多杀菌素衍生物(见图1)，并测试它们的体外抗肿瘤活性，研究不同连接基团对生物素标记多杀菌素衍生物抗肿瘤活性的影响。 ......