UPLC-MS/MS测定人血浆中诺氟沙星的含量及其应用
工作液,内标,1材料,1仪器,2试药,2方法,1色谱条件,2质谱条件,3标准工作液及质控工作液的配制,4标准曲线样品及质控样品配制,5生物样品处理方法,6方法学考察,7测定方法在生物等效性(BE)研究中的
刘海姣,廖音娟,唐智(.长沙市第四医院,长沙 40006;2.长沙都正生物科技有限责任公司,长沙 40000)诺氟沙星是一种广谱抗菌剂,已在多个国家使用,可有效治疗人类和动物的感染,用于治疗尿路感染、呼吸道感染、胃肠道感染、伤口感染等[1-5]。目前,有研究报道了海水、生物体液、食物以及人血浆中诺氟沙星的测定方法[4,6-8],常用的技术有紫外或荧光检测的高效液相色谱法、毛细管电泳法、分光光度法、薄层色谱法、微生物法等[9]。Maia 等[10]使用基于HLB 柱的固相萃取(SPE)进行液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)定量污水中7 种不同的氟喹诺酮类抗菌药物,Ziarrusta 等[11]使用液相色谱串联质谱法测定鱼组织、生物体液和环境水中的氟喹诺酮类药物。Helmy 等[12]用高效液相测定血浆中诺氟沙星的含量,Amjadi 等[13]使用硅掺杂碳点、铁(Ⅱ)和K2S2O8组成的化学发光系统测定人血浆中的诺氟沙星,有研究采用LC-MS/MS 法并使用环丙沙星作为内标定量测定人血浆中诺氟沙星的浓度[14],也有报道采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLCMS/MS)法测定血浆中诺氟沙星的浓度[15],但所需分析时间普遍较长(4 min 以上),未完善对方法学的考察,如未进行样品溶血基质效应、高血脂基质效应及全血稳定性的考察,这些因素均可影响到样本测试结果的准确性和可靠性。因此建立一种准确、可靠的检测人血浆样品中诺氟沙星浓度的分析方法至关重要。
本试验采用UPLC-MS/MS 法,以同位素为内标测定人血浆样品中诺氟沙星的浓度,检测过程更加简单、快速,极大地缩减了分析时间和项目实施成本,可以更好地应用于诺氟沙星人体生物等效性研究。
1 材料
1.1 仪器
UPLC I-Class、Xevo TQD 质谱仪,配有电喷雾离子源,UNIFI 数据处理软件(美国Waters 公司);MSA6.6S-CE 电子天平(Sartorius 公司);MilliQ Direct 8 超纯水仪(Merck Millipore公司);ST16R 离心机(Thermo Fisher Thermo 公司);Pipetman NEO 和Pipet-Lite XLS+移液器(Gilson 和RAININ 公司);XW-80A 涡旋混合器(宁波新芝);Talboys 数显多管式涡旋震荡器(Troemner 公司);DTA-27 超声波清洗器(鼎泰恒盛);GZX-9140MBE 电热鼓风干燥箱(上海博迅);MLTS1368 医用低温冰箱(Thermo 公司) ......
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