基于HIF-1α/Beclin1/LC3-Ⅱ信号通路探讨油桐花水提物对烫伤大鼠的作用机制
创面,1材料,1实验动物,2试药,3仪器,4药材,2方法,1油桐花水提物制备,2动物造模及给药,3取材,4指标检测,5统计学分析,3结果,1对大鼠烫伤创面的影响,2大鼠皮
彭健,王永萍,刘欣(贵州中医药大学 基础医学院,贵阳 550002)烧烫伤是指人们在生活或工作中被沸水、油烫伤,或者是被火、电、化学药物等灼烧,引起皮肤起泡或深层组织感染、溃烂、形成瘢痕的外伤病[1]。研究表明,缺氧诱导因子-1α(hypoxiainducible factors-1α,HIF-1α)、Beclin1蛋白及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(microtubule associated protein 1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)的表达与烫伤病理发展密切相关。HIF-1α是感应细胞内氧气浓度的最敏感因子,细胞缺氧程度常用HIF-1α的表达表示,且与自噬表达程度密切相关[2-3]。烫伤后HIF-1α表达增多,使大量Beclin1蛋白质释放形成自噬泡,诱导大量LC3-Ⅱ合成,导致自噬水平上升[4-6]。Beclin1、LC3-Ⅱ是反映自噬活性的标志性蛋白。中医认为烧烫伤属于“火毒、热毒”,常因火毒热气内攻,致皮肉溃烂,加重病情[7]。油桐为落叶性乔木,属大戟科油桐属,油桐花是蔷薇亚纲,大戟科植物油桐[Vernicia fordii(Hemsl.)Airy Shaw]的花,主产于我国南方地区,油桐全株皆可入药,但其根、皮、叶、果实均有毒,临床应用很少。油桐花毒性较小,归肺、心经,具有促进伤口愈合、消肿、镇痛、止血、麻醉等作用[8],古人早已用其治疗烧烫伤,疗效显著。本实验拟通过油桐花水提物调控HIF-1α/Beclin1/LC3-Ⅱ信号通路的表达来研究油桐花治疗烫伤的作用机制。
1 材料
1.1 实验动物
SPF级Wistar雄性大鼠60只,体质量(150±15)g [长沙天勤生物公司,动物许可证:SCXK(湘)2019-0013;实验动物合格证编号:No.1107262011001163]。
1.2 试药
硫化钠(批号:20191210,国药集团),湿润烧伤膏(批号:13923911455,汕头美宝制药),苏木素染液(批号:C200301)、伊红染液(批号:C200403)(珠海贝索生物),Beclin1、HIF-1α、LC3-Ⅱ ELISA试剂盒(批号分别为ml059015、ml003167、ml059507,上海酶联生物)。Beclin1、HIF-1α、LC3B抗体(批号分别为11306-1-ap、AF1009、AF5402,Affinity)。β-actin抗体(批号:AC026,Abclonal),生物素化山羊抗兔IgG(H+L)(批号:ab6721 ......
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