北柴胡水提液中13种化学成分分析及其肝损伤保护作用研究
纯度,批号,1材料与仪器,2仪器,2方法,1HPLC-Q-TOF-MS,MS法分析北柴胡水提液有效成分,2细胞实验,3结果,1北柴胡水提液化学成分鉴定,2LO2肝细胞急性损伤模型IC50值测定,3北柴胡水
杨奇涛,汪玉馨,吴殷囡,刘洋,孟长虹,谭力,陆益红,史清水(1.中国药科大学新药安全评价研究中心,南京 11198;.江苏省食品药品监督检验研究院,南京 10019;3.徐州医科大学药物分析教研室,江苏 徐州 1004)北柴胡作为常用的大宗药材,具有疏散退热、疏肝解郁、升举阳气之功效,其药效成分以柴胡皂苷为主,还有少量其他成分,而在较多的柴胡皂苷同分异构体中,柴胡皂苷A、D 的含量相对较高[1]。目前《中国药典》一部中普遍用单一或几个化学成分来对药材、饮片及其制剂进行定性和定量,这种方法忽略了中药多组分、多靶点、多途径协同作用的特点,利用单一或几个成分进行评价和控制,不能正确衡量中药的质量与药效,只有充分利用现代色谱、光谱、质谱手段,特别是液相色谱/质谱联用技术,才能实现在单次分析中对多个微量及痕量成分,包括同分异构体的定性和定量分析[2-5]。
因此本研究利用HPLC-Q-TOF-MS/MS 技术对北柴胡水提液的有效成分群进行表征,首先通过对各化合物进行鉴定并获得精确分子量以及充分的碰撞解离碎片信息,并对其二级裂解规律进行了分析,从而鉴定出北柴胡水提液中的主要化学成分,为柴胡以及其相关制剂标准的制订和体内物质基础研究提供参考。前期课题组曾对柴胡及其制剂正柴胡颗粒对对乙酰氨基酚(APAP)所致急性肝损伤的作用进行研究,发现柴胡预给药具有减毒作用[6-8],故利用APAP 诱导的LO2 肝细胞损伤模型对北柴胡水提液中主要活性成分进行筛选与比较,以期能够较为全面地评价北柴胡各单体成分的药效及毒性。
1 材料与仪器
1.1 材料
北柴胡生药饮片(由南通精华药业有限公司提供并鉴定为伞形科植物柴胡Bupleurum chinensisDC.的干燥根);柴胡皂苷A(纯度≥98%,批号:MUST-17120313)、柴胡皂苷B1(纯度≥99%,批号:MUST-18010302)、柴胡皂苷B2(纯度≥99%,批号:MUST-18032104)、柴胡皂苷B3(纯度≥98%,批号:MUST-18060116)、柴胡皂苷B4(纯度≥97%,批号:MUST-17110117)、柴胡皂苷C(纯度≥98%,批号:MUST-18031402)、柴胡皂苷D(纯度≥99%,批号:MUST-17111510)、柴胡皂苷F(纯度≥98%,批号:MUST-18031806)、柴胡皂苷G(纯度≥98%,批号:MUST-18072216)、柴胡皂苷H(纯度≥98%,批号:MUST-18040205)、柴胡皂苷I(纯度≥97% ......
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