鲍倩倩，王强，桑冉，王雷*，陈卫东*(1. 安徽中医药大学药学院，合肥 230012；2.中药复方安徽省重点实验室，合肥 230012；3. 药物制剂技术与应用安徽省重点实验室，合肥 230012；4. 蚌埠医学院第一附属医院，安徽 蚌埠 233000；5. 蚌埠医学院，安徽 蚌埠 233030)

    外泌体(exosomes，Exos)是一种几乎所有类型的细胞都会分泌的细胞外囊泡，其直径约为100 nm。近年来，Exos作为载药体系受到了越来越广泛的关注，与其他载药系统相比，Exos因源于自体而具有免疫原性低、生物相容性高等特点；更重要的是，Exos具有潜在的靶向能力，有助于提高药物的靶向能力。但载药量较低、修饰的灵活性低，且稳定性差等缺点极大地制约了Exos作为药物载体的进一步开发应用。

    脂质体(liposomes，Lips)是磷脂在水中形成的一种具有磷脂双分子层的囊泡，粒径一般在40～200 nm。Lips因其载药性能良好、易于制备和修饰灵活而被作为药物载体广泛应用，但Lips属于外源性物质，易被单核巨噬细胞系统快速清除且靶向性较差。Exos与Lips在结构上相似，都具有脂质双分子层，粒径相近；在生理功能上，两者具有良好的互补性。因此，将这两种纳米囊泡融合形成一个新的杂化纳米囊泡可以保留两者的优点。这种巨噬细胞外泌体-脂质体杂化纳米粒(macrophages derived exosomes-liposomes hybrid nanoparticles，MEL NPs)同时具有Exos的内源性和Lips修饰的灵活性，还能提高Exos的稳定性。基于此，本研究采用超声法融合Exos与Lips，并对融合后的MEL NPs进行表征，为MEL NPs作为药物载体的后续研究提供基础。

    1 材料

    1.1 仪器

    DF-101S集热式恒温磁力搅拌器(巩义市予华仪器有限责任公司)；Tecnai G2 SpirtBiotwin透射电子显微镜(美国赛默飞公司)；Nano ZS90马尔文粒度分析仪(美国马尔文公司)；anti-JP-1高速低温离心机、L-90K超高速低温离心机、CYTOMICS FC 500流式细胞仪(美国贝克曼公司)；F-4600荧光分光光度计(日本Hitachi公司)；THUNDER 倒置荧光显微镜(德国徕卡公司)；JY92-Ⅱ超声波细胞粉碎机(宁波新芝生物科技股份有限公司)。

    1.2 试药

    DMEM高糖培养基、青霉素-链霉素、胎牛血清(美国Hyclone公司)；细胞膜橙色荧光探针(DiI)染料(大连美仑生物技术有限公司)；细胞膜红色荧光探针(DiD)、细胞膜绿色荧光探针(DiO)染料(上海碧云天试剂公司)；3%醋酸双氧铀染液(河南锐欣实验用品有限公司)；胆固醇、蛋黄卵磷脂(上海源叶生物科技有限公司)；泊洛沙姆188(北京金克隆生物技术有限公司)；多聚甲醛、DAPI、抗荧光淬灭剂(安徽Biosharp公司)；一抗稀释液、HRP标记的山羊抗兔IgG、ECL发 光 液(山 东SparkJade公 司)；TSG101、Alix抗体(成都正能生物公司) ......