周太敏，何华，徐娇，江维克，潘琪，张成刚，周涛(贵州中医药大学，贵阳 550025)

    中药材续断来源于川续断科植物川续断

    Dipsacus asper

    Wall. ex Henry的干燥根，具有补肝肾、强筋骨、续折伤等功效。川续断皂苷Ⅵ是续断药材质量评价的指标成分，现代药理研究表明其能预防骨质疏松、镇痛。2020年版《中国药典》规定续断药材需进行发汗加工。已有研究结果表明，续断经发汗加工后，川续断皂苷Ⅵ的含量会显著升高，但是其对应的机制尚不清楚。研究表明，真菌在促进萜类、生物碱类等中药活性成分的转化及积累中发挥作用，可以用于提高中药活性成分的含量，其对应的机制主要包括提供底物转化的关键酶以及作为诱导子激发特定次级代谢产物的合成。赵慧在厚朴发汗的研究中发现，不同发汗阶段的厚朴中内生真菌的数量存在差异，而内生真菌会对厚朴次级代谢产物的形成具有一定影响。

    基于上述研究背景，推测续断发汗后药材中川续断皂苷Ⅵ含量的变化与其真菌群落的构成有一定关系。因此，本研究在前期建立的续断发汗条件的基础上，对续断发汗前后药材中的真菌群落进行高通量测序，分析发汗前后续断中的真菌群落差异，筛选出发汗续断中的优势菌，将优势菌制备成诱导子与川续断无菌苗共培养，探讨优势菌对发汗药材中川续断皂苷Ⅵ含量变化的影响，为解析中药材发汗加工的科学内涵奠定理论基础。

    1 材料

    1.1 试药

    新鲜川续断、川续断成熟种子采于贵州省龙里县，经贵州中医药大学江维克教授鉴定为川续断科植物川续断

    Dipsacus asper

    Wall. ex Henry。将根洗净，切段，取部分进行发汗处理，标记为DP3，未发汗样品标记为CK。川续断无菌苗来源于贵州中医药大学中药民族药资源研究院组培室；镰刀菌属(

    Fusarium

    sp.)菌株J35由本课题组从川续断中分离鉴定。

    对照品川续断皂苷Ⅵ(批号：111685-201305，纯度：99.29%，成都埃法生物科技有限公司)；乙腈(色谱纯)、95%乙醇(分析纯)(国药集团化学试剂有限公司)；水为自制超纯水；其他试剂均为分析纯。微生物总DNA提取采用DNA试剂盒(Omega Biotek)；在上海美吉生物医药科技有限公司进行微生物测序。

    1.2 仪器

    Waters e2695高效液相色谱仪(Alliance 2695，美国沃特斯公司)；电子天平(AG285，瑞士梅特勒公司)；振荡培养箱(BSD-150 ......