崔乃菠，马境谦，余河水，3，李正，2，3，何永志，3，别松涛，3*(. 天津中医药大学 中药制药工程学院，天津 3067；2. 组分中药国家重点实验室，天津 3067；3. 中药制药工程市级实验教学示范中心，天津 3067)

    菊叶薯蓣(

    Dioscorea composita

    Hemsl.)为薯蓣科薯蓣属植物，是甾体激素药物的重要来源。薯蓣皂苷主要存在于菊叶薯蓣的根和块茎中，具有抗炎、抗真菌、抗纤维化、免疫调节等多种生物活性，对肝脏、心血管系统等多器官系统具有保护作用。研究发现，菊叶薯蓣中的甾体皂苷类成分经微生物发酵后会发生转化，产生次级皂苷及薯蓣皂苷元。在此过程中，不仅原有成分的含量会发生改变，还可能会产生新的物质，药效成分含量提高，药物活性增强。响应面分析法(RSA)是目前常用的多元统计技术，其与中心组合设计(CCD)结合可广泛应用于参数较少但参数间存在交互作用的参数条件的优化，改善了传统技术的不足，节省时间、试剂与材料，降低实验成本。目前，此方法已逐渐应用于优化中药有效成分的提取。

    2020年版《中国药典》未收录菊叶薯蓣，也未见生物富集菊叶薯蓣中薯蓣皂苷的报道，本研究以高效液相色谱法测得的菊叶薯蓣中的薯蓣皂苷含量为考察指标，采用单因素实验考察发酵时间、发酵温度、接种量对发酵过程中薯蓣皂苷含量的影响。在此基础上，采用响应面分析法进一步优化发酵条件，富集薯蓣皂苷，为菊叶薯蓣的深入开发与综合利用提供依据。

    1 材料

    1.1 试药

    菊叶薯蓣药材，采自云南省会泽县，经天津中医药大学中药鉴定教研室张丽娟教授鉴定为薯蓣科薯蓣属植物菊叶薯蓣的干燥根茎；活性干酵母(安琪酵母股份有限公司)；马铃薯葡萄糖肉汤(PDB北京索莱宝科技有限公司)；薯蓣皂苷对照品(批号：Y20A10Z95575，纯度≥98%，上海源叶生物科技有限公司)；乙腈(色谱纯，美国Fisher公司)；乙醇(色谱纯，天津风船化学试剂科技有限公司)；水为超纯水。

    1.2 仪器

    Waters e2695HPLC色谱系统(四元泵、真空在线脱气机、自动进样器、柱温箱和Empower 色谱工作站，配有2424蒸发光散射检测器，美国活特世)；SB-5200DTD型数控超声波清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司)；CP1003电子天平[奥豪斯仪器(常州)有限公司]；AB135-S电子分析天平(Mettler Toledo)；中草药粉碎机(天津市泰斯仪器有限公司)；Milli-Q 超纯水处理系统(美国 Millipore 公司)；恒温培养振荡器(上海智城分析仪器制造有限公司)；洁净工作台(苏州安泰空气技术有限公司)；台式高速冷冻离心机H1650R(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司)；立式压力蒸汽灭菌器(上海云泰仪器仪表有限公司) ......