刘加涛，孙小珊，宋帅，苏涌，夏泉(安徽医科大学第一附属医院药剂科，合肥 230032)

    甲氨蝶呤(MTX)是一种抗叶酸药物，通过抑制叶酸生物合成中的关键酶二氢叶酸还原酶发挥活性，广泛用于类风湿关节炎、白血病、淋巴瘤、骨肉瘤等疾病。MTX血药浓度升高可能导致MTX毒性风险增加，包括肾毒性、中枢神经毒性、皮肤毒性、胃肠道毒性、血液学毒性、肝毒性和肺毒性，充分水化和碱化尿液可以减少这些不良反应的发生率。MTX不良反应的发生频率和严重程度与给药途径和血药浓度有关，大多数毒性作用与血药浓度有关，并且如果能早期发现并进行亚叶酸钙解救治疗通常是可逆的。MTX治疗(尤其是高剂量时)的不良反应发生率高，患者个体间的药代动力学和药效学变化大，需要对MTX进行常规监测，以指导亚叶酸类似物的解救治疗方案，降低MTX毒性反应。

    MTX的监测方法有多种，早期的分析方法虽然灵敏度高，但是耗时耗力并要求使用放射性同位素；而使用抗体的生物分析方法，如放射免疫分析、荧光偏振免疫分析和酶放大免疫测定法，虽具有操作简单、检测速度快和成本低等多种优势，但由于MTX与其代谢物之间潜在的抗体交叉反应，导致结果的准确性和特异性降低。此外，采用串联质谱(MS-MS)检测MTX的方法虽具有灵敏度高、准确性好等优点，但质谱相关设施昂贵，操作要求较高，医院难以常规配备。因此，本研究旨在建立一种简单、快速、特异、灵敏的MTX血药浓度测定的全自动二维高效液相色谱(2D-LC)法，并在使用MTX治疗的患者的常规药物浓度监测中进行初步验证。

    1 仪器与试药

    1.1 仪器

    2D-LC-UV系统由FLC全自动二维液相色谱耦合仪(湖南德米特仪器有限公司)及岛津LC-20A液相色谱部件构成，FLC连接第一维色谱泵、第二维色谱泵、检测器、自动进样器等色谱模块；其中第一维色谱系统(LC1)完成样品富集及一维分离，第二维色谱系统(LC2)完成进一步分离检测，两维系统通过智能流路控制系统(TRS)连接，采用“中心切割”模式转移目标物，中间转移柱同时承担转移、拦截杂质的功能，工作站为Lab Solution 工作站 ......