罗灿，陈昕怡，王敏*，李先平，李采霞(. 中南大学湘雅二医院检验科，长沙 400；. 中国人民解放军联勤保障部队第 904 医院(无锡市太湖医院)生殖中心，江苏 无锡 4044)

    肺炎克雷伯菌(KPN)是常见的医院机会致病菌，可引起肺炎、肝脓肿、泌尿系统感染、败血症、创伤感染、脑膜炎等感染。2017年中国细菌耐药监测网(CHINET)的数据显示，KPN在我国临床菌株分离率中居第二位(14.68%)，仅次于大肠埃希菌(19.27%)。据文献报道，氨基糖苷类药物可以作为临床经验治疗KPN感染的首选用药。以氨基糖苷类药敏分型为代表的表型分型，简便快速，能较好地指导临床用药。但药敏分型仅据表型特征进行分类，无法满足从基因水平上发现菌株之间的联系和变异来追踪感染源的要求。对KPN进行基因分型，了解其感染的分子流行病学是医院感染分析的重要任务。作为KPN基因分型技术之一，RAPD分型快速、简便、经济、多态性检出率高、可自动化分析，可在DNA水平上反映生物品种鉴定、系谱分析、追溯生物同源性。本文采用RAPD技术对临床分离的82株KPN进行基因分型，并与氨基糖苷类药敏分型进行对比分析，为追溯KPN的同源性，防止KPN的克隆性传播以及指导临床KPN的治疗提供依据。

    1 材料

    1.1 菌株

    收集中南大学湘雅二医院2016年8月至2017年2月住院患者临床标本中分离的非重复KPN 82株，分离自痰标本、粪便标本、尿液标本、血液标本、分泌物标本和咽拭子标本。标本主要分布于ICU、呼吸内科、新生儿科、神经外科等病区。菌株均经Phoenix 100全自动细菌鉴定系统鉴定后再按第九版伯杰氏细菌鉴定手册要求确认。

    1.2 试药和仪器

    MasterMixPCR扩增试剂、DNA Marker I(100-600bp)、细菌基因组DNA提取试剂盒[天根生化科技(北京)有限公司]；Phoenix 100全自动细菌鉴定系统(美国BD公司)；PCR扩增仪(美国应用生物系统公司)；JY300C型电泳仪(北京君逸东方电泳设备有限公司)；FluorChem FC2凝胶成像系统(美国Alpha Innotech 公司)。

    1.3 RAPD引物

    引物序列RAPD 1(5'-GGGATGGAAC-3')、RAPD 2(5'-AAGAGCCCGT-3')、RAPD 3(5'-AACGCGCAAC-3')和OPA 2(5'-TGCCGAGCTG-3')均由上海生工生物工程技术有限公司合成 ......