周瑞，唐志书，苏洁，任美，任素娟，刘妍如，潘亚磊，宋忠兴(陕西中医药大学/陕西中药资源产业化省部共建协同创新中心/秦药特色资源研究开发国家重点实验室(培育)/陕西省创新药物研究中心，陕西 咸阳 712083)

    放疗是临床上治疗肿瘤的重要手段，而机体经过多次辐照，射线在杀死肿瘤细胞的同时，对正常组织也会造成不可逆的损伤。文献报道辐照会导致水电解为氧化自由基，从而对机体细胞产生不可逆转的氧化应激损伤。血管内皮细胞是辐照诱发机体损伤的重要防御细胞，也是最易受到氧化损伤的细胞，因而，是用于体外研究药物抗氧化损伤的理想模型。

    正源方是由西洋参、仙鹤草、南沙参、当归、重楼组方而成的临床经验方，是根据李东垣《内外病辨惑论》中的“当归补血汤”加减而来的，即原方去黄芪后，加西洋参、南沙参、仙鹤草、重楼而成，在临床已经应用近20年，其主要功效为益气养阴、清热解毒，对于恶性肿瘤放疗及特殊辐射损伤引起的血小板减少，白细胞下降，毛发脱落，皮肤红疹、斑疹、紫癜等症具有较好的疗效，能有效改善放疗后气血亏虚患者中医证候表现，并且缓解患者因放疗引起的毒副作用。前期本课题组完成了正源方的提取工艺研究及特征指纹图谱建立，也有研究证实了正源方对辐射动物和化疗引起的动物损伤具有较好的治疗效果。但是，正源方的体外抗氧化损伤作用尚不明确。因此，本文通过过氧化氢(HO)诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)构建氧化损伤模型，探讨正源方对血管内皮细胞氧化损伤的保护作用及其机制，为其抗辐射作用及临床应用提供理论依据。

    1 材料

    1.1 细胞

    HUVEC(北京吉纳生物科技有限公司)。

    1.2 试药

    正源方的提取及制备方法参考文献，Ham’s F-12K 培养基(武汉普诺赛生命科技有限公司)；胎牛血清、青链霉素混合液(Biological Industries)；30%HO、MTT、二甲基亚砜(DMSO)(天津市科密欧化学试剂有限公司)；ECL 超敏发光液(上海天能科技有限公司)；罗丹明123 检测试剂盒、活性氧检测试剂盒(碧云天生物)；乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(批号：A020-2-2)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)检测试剂盒(批号：A001-1-1)及丙二醛(MDA)检测试剂盒(批号：A003-4-1)(南京建成生物工程材料有限公司)；RIPA 细胞裂解液(批号：HJ194302)、BCA 蛋白定量试剂盒(批号：U9229)(天根生物科技有限公司)；p-38 蛋白抗体、p-p38 蛋白抗体(万类生物)；p-JNK 蛋白抗体、JNK 蛋白抗体、p-ERK 蛋白抗体(Cell signaling Techenology 公司)；ERK 蛋白抗体、兔二抗(美国Proteintech 公司) ......