陈旭，周游，刘琳，王冬雪(哈尔滨商业大学药学院，哈尔滨 150010)

    据国际糖尿病联盟统计，2021年全球20～ 79岁人群的糖尿病患病率高达10.5%(5.366亿人)，保守预测到2045年其发病率将上升至12.2%[1]。糖尿病发病过程中会引起不同程度的认知损害[2]，脑脊液中的主要生物标志物如β-淀粉样蛋白(amyloidβ-protein，Aβ)、tau蛋白、乙酰胆碱(acetylcholine，Ach)等[3-4]，参与机体众多的生理功能，与认知障碍的发生发展密切相关[5]。本文通过改良小脑延髓池穿刺法对糖尿病大鼠脑脊液进行连续采集，测定脑脊液中Aβ42、p-tau、Ach的含量，为明确黄连-干姜的药物作用提供基础。

    1 材料

    1.1 动物

    雄性Wistar大鼠60只，8～10周龄，体质量(200±20)g [北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK(京)2012-0001]。动物分组分笼饲养于 12 h明暗交替的环境中，温度为 18～21℃，相对湿度为(50±5)%。实验动物采用标准饲料喂养，实验期间可自由摄食、饮水。

    1.2 试药

    黄连、干姜(哈尔滨世一堂药材公司)，经哈尔滨商业大学药用植物教研室张德连教授鉴定分别为毛茛科植物黄连(Coptis chinensisFranch.)的干燥根茎、姜科植物姜(Zingiber officinale Rosc.)的干燥根茎；链脲佐菌素(streptozotocin，STZ，北京博爱科贸有限公司Sigma分装，批号：S0130)；葡萄糖测定试剂盒(长春汇力，批号：050411)；盐酸二甲双胍片(澳大利亚艾华大药厂，批号：A108R，规格：每片含盐酸二甲双胍0.5 g)；Ra Ach ELISA 试剂盒、Ra Aβ42 ELISA 试剂盒、Ra p-tau ELISA 试剂盒[上海蓝基(BG)生物科技有限公司]。

    1.3 仪器

    一次性使用静脉输液针(江西洪达医疗器械集团有限公司)；标准型单臂脑立体定位仪(型号68001，深圳市瑞沃德生命科技有限公司)；酶标分析仪(型号RT-6000，RAYTO公司)。

    2 方法

    2.1 模型复制

    2.1.1 缓冲液的配制 A液：2.10 g柠檬酸(分子量210.14)溶于100 mL无菌注射用水，配制成0.1 mol·L-1柠檬酸溶液；B液：2.94 g柠檬酸钠(分子量294.10)溶于100 mL无菌注射用水 ......