许英，陈玲，张兰，朱斌，杨阳，王晓梅，洪倩*(1.徐州医科大学附属淮海医院，江苏 徐州 221004；2.中国人民解放军陆军第七十一集团军医院，江苏 徐州 221004)

    阿尔茨海默病(AD)是最常见的神经退行性疾病，是老年人群中主要的痴呆症。据估计，2018年全球有4400万人患有AD。淀粉样斑块的积累和神经原纤维缠结(NFT)的形成是AD的两个典型病理特征。β-淀粉样蛋白(Aβ)聚集在有害的寡聚体和原纤维中，包括神经元细胞死亡。已知该寡聚体会诱导氧化应激，从而触发神经炎症并加速疾病的发展。因此，抑制Aβ的产生，从治疗和预防的角度来看可能是具有意义的。此外，tau过度磷酸化被认为是tau蛋白病的主要诱因，大量证据表明，在体外和体内多个AD相关位点都显示强烈的tau磷酸化[1]。

    阿魏酸(4-羟基-3-甲氧基肉桂酸，FA)是一种酚类化合物，天然存在于植物细胞的细胞壁中，已被证明具有广泛的药理作用，如抗炎、抗糖尿病、抗肿瘤、抗衰老和神经保护。前期研究证实阿魏酸对脂多糖(LPS)刺激或Aβ25-35损伤的PC12细胞具有保护作用，表明阿魏酸具有潜在的神经保护作用[2-4]。然而，关于阿魏酸降低Aβ水平作用的确切机制尚不清楚。在本研究中，课题组使用稳定转染了人类淀粉样蛋白前体蛋白(APP)的人类神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞来评估阿魏酸对AD的影响及相关分子机制。

    1 材料

    1.1 试药

    阿魏酸(中国食品药品检定研究院，批号：110773-201614，通过归一化HPLC-ELSD检测确定纯度超过98%)；MTS、caspase-Glo 3/7分析检测试剂盒(Promega公司)；Tris缓冲液、甘氨酸、SDS和胎牛血清(BSA)(Amresco公司)；盐酸嘌呤霉素、DMEM培养基(Gibco公司)；Cleaved caspase-9、GAPDH兔单克隆抗体、山羊抗兔-HRP和山羊抗小 鼠-HRP(Cell Signaling Technology公司)；磷酸化GSK-3β(Y216)兔多克隆抗体(Abcam公司)；Aβ40和Aβ42 ELISA检测试剂盒(Thermo Fisher Scientific)；Aβ42(Sigma-Aldrich)。其他化学药品均为国产分析纯。

    1.2 仪器

    CO2培养箱(ThermoForma公司)；Quintix 224-1CN 型电子分析天平(最大载荷 220 g，分度值 0.1 mg，德国 Sartorius公司)；Western blot转膜仪(Bio-Rad公司)；电泳仪(Amersham公司)；TS-2型脱色摇床及 TS-8型转移脱色摇床(江苏海门市麒麟贝尔仪器制造有限公司)；Minispin5452 型高速离心机(德国 Eppendorf 公司)；Molecular Devices Flex Station 3微孔板读数仪(美谷分子公司)；BC-5390CRP 型全自动细胞计数仪(迈瑞医疗国际公司) ......