常明智，张思雨，郝艳娇，张森露，张晓丽*(.河北北方学院，河北 张家口 075000；.新乡医学院三全学院，河南 新乡 453003)

    食管癌是常见的消化道肿瘤，国际癌症研究机构统计的“2018年全球癌症发病率和病死率”数据显示，在全球恶性肿瘤中食管癌的发病率和病死率分别位居第七位和第六位[1-2]。临床治疗食管癌主要以局部放疗和全身化疗为主，但由于食管癌早期症状隐匿，患者就诊时多已发展至中晚期，导致疗效欠佳且毒副作用明显，严重影响患者预后。因此寻找疗效明显、副作用小的抗食管癌药物成了亟需解决的问题之一。黄芪是我国传统的补气中药之一，含有多种化学成分，具有增强免疫力、抗肿瘤、抗衰老等作用。黄芪多糖是黄芪的主要有效成分之一，相关研究证实了黄芪多糖对多种肿瘤细胞都有抑制作用[3-4]。

    自噬是在自噬相关基因的调控下溶酶体自我降解代谢的过程，是包括肿瘤发生、发展、细胞死亡和存活在内的各种生理病理过程中的一个关键机制[5-6]。自噬被证明与凋亡有复杂的关系，特别是在肿瘤细胞系中。正常情况下，自噬在细胞生长，发育和稳态中发挥重要作用，是一种依赖溶酶体对异常的细胞器和蛋白质等物质进行降解的过程，然而，当自噬持续发生时，会引起细胞非程序性死亡从而抑制细胞的增殖[7]。自噬在抗肿瘤作用机制中具有重要意义，但是黄芪多糖抗食管癌的作用机制是否与影响细胞自噬水平有关仍待探索。

    本课题组拟通过体外培养食管癌EC109细胞，探讨黄芪多糖能否通过调控食管癌EC109细胞自噬水平进而影响EC109细胞的生物学行为。

    1 材料

    1.1 细胞

    食管癌EC109细胞系(中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库)。

    1.2 试药

    注射用黄芪多糖(批号：210202，天津赛诺制药有限公司，每瓶含黄芪多糖250 mg)。噻唑蓝(MTT)试剂盒和BCA蛋白定量试剂盒(北京索莱宝有限公司)；DMEM高糖培养基(美国CORNING公司)；胎牛血清(美国Gegrogen公司)；胰蛋白酶(南京凯基生物科技有限公司)；微管相关蛋白1轻链3(LC3B抗体)和人死骨片1(P62抗体)(美国CST公司)；自噬效应蛋白Beclin1(Abcam公司)；自噬抑制剂PIK-Ⅲ(Selleck公司)。

    1.3 仪器

    S-3400N扫描电镜和冷冻干燥机(日本日立公司)；流式细胞仪(美国BD公司)；二氧化碳恒温孵化器(美国热电公司)；电泳仪(北京六一仪器厂)；超灵敏多功能成像仪600(美国GE公司) ......