耿业业，王桂荣，张远帆，白钰，陈莹，朱成豪，吴繁琦，侯俊玲，孙志蓉(北京中医药大学中药学院，北京 102488)

    甘草(Glycyrrhiza uralensisFisch.)是豆科多年生草本植物，以根与根茎入药，具有补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药之功效，有“十方九草”“国老”的美誉[1]，在医药、食品、化工等领域应用广泛，市场需求量大。目前野生甘草资源逐渐减少，人工栽培甘草成为解决供需矛盾的有效途径。野生甘草具有根瘤固氮特性[2]，是甘草植株氮营养的重要来源之一，但人工栽培甘草的水肥措施会减少甘草根部结瘤量[3]，质量不及野生甘草[4]。豆科植物氮素来源有土壤供氮、肥料供氮和根瘤固氮三种。根瘤固氮在花生、大豆等豆科经济作物的生长中发挥着重要作用，郑永美等[5]研究表明，花生的根瘤固氮占总氮量的40%以上，最高可达50%。人工甘草栽培过程中接种根瘤菌剂，能提高10%～30%的产量[6]。根瘤菌剂施入土壤后，土壤中营养元素的形态和含量会对豆科植物结瘤固氮的效果产生影响[7]，其中氮素和磷素对结瘤影响较大。已有的根瘤固氮研究多集中在大豆、花生、紫花苜蓿等豆科经济作物[8-9]。目前甘草根瘤固氮方面根瘤菌分离鉴定、遗传多样性分析及系统进化分析的研究较多[10]，氮素、磷素对甘草结瘤以及固氮活力的影响还不清楚。本文以盆栽甘草为研究对象，考察不同浓度的氮素和磷素对施加根瘤菌剂的甘草结瘤量及根瘤固氮活力的影响，探讨营养元素对甘草根瘤固氮作用的影响，为甘草栽培措施选定提供参考。

    1 材料

    1.1 试药

    甘草种子由中国中药有限公司提供，经北京中医药大学中药学院孙志蓉教授鉴定为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensisFisch.的种子。根瘤菌购自中国普通微生物菌种保藏管理中心，为天山中间根瘤菌(Mesorhizobium tianshanense.)，菌株编号“1.2546”。酵母粉(Solarbio)、琼脂粉(北京奥博星生物技术有限责任公司)；甘露醇(Beijing Lablead Biotech Co.，Ltd)；硫酸铵(福晨化学试剂有限公司)；磷酸二氢钾(天津市兴复科技发展有限公司)；pH 6.8 磷酸缓冲液(国家化学试剂质检中心)；牛血红蛋白(上海源叶生物科技有限公司)；甘草酸(批号：P24J10F91300)、甘草苷(批号：Z10J8X39611)对照品(上海源叶生物科技有限公司，均供含量测定用)；乙腈和磷酸(Fisher chemical 美国，均为色谱纯)；乙醇(北京化工厂 ......