周爽，李慧敏，张行行，史永恒，王川，王国全，李敏，王斌(陕西中医药大学，陕西 咸阳 712046)

    脑缺血损伤可触发一系列的有害事件，包括谷氨酸相关的兴奋性毒性、炎症、氧化应激和细胞凋亡。近年来，越来越多的研究关注炎症在脑缺血发病中的作用。缺血性病变中分泌的炎症介质，包括细胞因子、前列腺素、自由基和趋化因子，可以招募其他免疫细胞，参与已经过度激活的炎症反应，导致脑细胞进一步损伤。因此，调节炎症相关通路，减少炎症因子的释放，对改善脑损伤具有重要意义。白三烯B4(leukotriene B4，LTB4)是不饱和脂肪酸通过5-脂氧合酶(5-lipoxygenase，5-LOX)途径中重要的下游代谢产物，与细胞膜上的白三烯受体(leukotriene B4 reportor，BLTR)结合。BLTR即BLT1 和BLT2，参与并增强炎症反应。越来越多的证据表明，血浆中LTB4 水平可以作为急性脑卒中患者临床预后不良的生物标志，但LTB4 在脑损伤中的作用机制尚不明确。

    黄芩苷(BC)、栀子苷(GP)是中药黄芩和栀子的主要活性成分。依据中医基础理论“清热解毒”的现代化研究，课题组的前期实验研究发现，BC/GP(最佳配伍比例7∶3)联合应用可减轻脑缺血大鼠缺血区的炎性损伤和组织水肿，可缓解脑缺血损伤后的炎症反应，并通过下调5-LOX 起到脑保护的作用。有研究指出，抑制5-LOX 的净效应可能掩盖了LTB4 的作用，如影响中性粒细胞浸润和细胞因子等作用。为进一步探讨BC/GP 是否调控LTB4 发挥抗脑缺血损伤的作用机制，本实验建立脑缺血大鼠再灌注模型，探讨LTB4 通路在脑缺血再灌注中的作用机制，及BC/GP 是否可以有效调控LTB4/BLTR 通路降低脑损伤，为进一步研究缺血性脑卒中的诊断和临床治疗提供依据。

    1 材料

    1.1 仪器

    大鼠LTB4-ELISA 试剂盒(深圳欣博盛科技有限公司，批号20160712)；ElX800 酶标仪(Bio-TEK 公司)；miniprotean3cell 电泳仪(Bio-R-AD 公司)；Milli-Q 纯水机(Millipore 公司)；5430R 型冷冻离心机(Eppendorf 公司)。

    1.2 试药

    黄芩苷、栀子苷(北京索莱宝生物公司，含量≥98%，批号：20201007)；白三烯B4 受体阻断剂LY255283(abcam，HY-15744)；BLT1抗体(abcam，ab95492)；BLT2 抗体(abcam ......