单贺珍，董石，李晓瑞，董宇曦，刘秀盈，何宇，王建勋，2*(.北京中医药大学生命科学学院，北京 02488；2.深圳北京中医药大学研究院，广东 深圳 5872；.中国农业大学生物学院，北京 009)

    嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，CAR)T细胞免疫疗法是抗肿瘤领域的一种新型细胞疗法。近年来，多款抗CD19 CAR-T细胞产品陆续获批上市，它对B细胞恶性淋巴瘤的疗效显著，特别是弥漫性大B细胞淋巴瘤，完全有效率可达54%。然而，抗CD19 CAR-T细胞疗法的不良反应不可忽视，比如神经毒性和细胞因子综合征(cytokine release syndrome，CRS)，严重者甚至会危及患者的生命。

    中药金银花(Lonicera japonica，LJ)具有清热解毒、抗炎消肿的功效，临床上广泛用于发热、扁桃体炎、肺炎、鼻炎及皮疹等。有体外实验表明，金银花提取物可以阻碍脂多糖诱导神经小胶质细胞与免疫巨噬细胞分泌炎症因子，抑制补体活性。这提示金银花可能有助于缓解抗CD19 CAR-T细胞导致的CRS。

    因此，本实验将金银花水煎剂与抗CD19 CAR-T细胞联合处理表达CD19的Burkitt’s淋巴瘤细胞(Raji细胞)，以探究金银花对抗CD19 CAR-T细胞肿瘤杀伤能力，细胞因子释放以及程序性死亡蛋白(programmed death-1，PD-1)表达的影响，以期为恶性B细胞淋巴瘤患者提供新的治疗方案。

    1 材料

    1.1 仪器

    流式细胞分析仪(LSRFortessa SORP，BD)；酶标仪(Epoch 2TC，BioTek)；细胞自动计数仪(Invitrogen Countess II FL，ThermoFisher)。

    1.2 试药

    RPMI 1640培养基、AIMV培养基、胎牛血清(FBS)(Gibco公司)；CD3-APC抗体、PD-1-PE抗体、c-Myc-PE抗体、Human CD8/NK Panel检测试剂盒、CFSE荧光染料(Bio-Legend公司)；细胞凋亡检测试剂盒(北京金普来生物科技有限公司)；Bright-LumiⅡ萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒(碧云天生物技术公司)；金银花中药饮片[中国北京同仁堂(集团)有限公司]。

    1.3 细胞系

    Burkitt’s淋巴瘤细胞(Raji细胞，美国 ATCC细胞库)；Raji-荧光素酶标记细胞(Raji-Luc ......