曾晓艳，林雅丽，刘应蛟*，黄玉婷，龚力民，刘塔斯(.湖南中医药大学药学院，长沙 40000；.江西中医药大学药学院，南昌 330004)

    五步蛇又名蕲蛇，学名尖吻蝮蛇，属于蝰科动物，主要分布在我国湖南、湖北、福建等黄河以南的地区，国外仅见于越南北部[1]。蛇毒是从毒蛇的毒腺中分泌出来的一种毒液，属于生物毒素，是所有毒素中结构最为复杂的一类物质，其主要化学成分为毒蛋白、多肽和酶类等二十种以上的生物活性物质[2]。在神经系统、心血管系统方面应用广泛。随着研究的不断深入，分子生物学和蛋白质组学的发展，蛇毒的一些有效成分被相继提取并应用于临床，在抗肿瘤、抗风湿、抗炎、抗凝血以及神经系统疾病治疗方面均有较好的疗效。

    炎症反应是一种重要的机体防御过程，实质上是机体与致炎因子进行抗争的反应，最终使机体的内环境以及内环境和外环境之间达到新的平衡。免疫细胞激活是炎症反应的启动环节。RAW264.7巨噬细胞是炎症反应的重要效应细胞，在脂多糖(LPS)等外界因素刺激后能产生大量炎症细胞因子，如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和一氧化氮(NO)等[3]。近年来神经毒素在抗炎方面的研究也成为一个热点，认为神经毒素能通过抑制多型核细胞的迁移产生一个长时程抗炎作用[4]。陶方方等[5]采用蕲蛇蛇毒对胶原诱导型关节炎大鼠血清TNF-α、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)的影响；蕲蛇毒素对大鼠佐剂性关节炎具有抑制作用[6]；蕲蛇提取物醇溶性和水溶性部位有一定的抗风湿关节炎作用[7]。目前蕲蛇蛇毒对炎症的发生发展还不明确。LPS作为触发炎症的因子，LPS与巨噬细胞膜上的Tolllike受体接触，刺激巨噬细胞，使巨噬细胞产生多种细胞因子和炎性介质，动物机体在致炎因子的作用下发生炎症反应[8]。此类致炎因子包括TNF-α、IL-6和NO等，对巨噬细胞发挥吞噬、抗原提呈及炎症调节等功能具有重要作用[9-10]。因而本实验采用LPS刺激RAW264.7细胞形成体外炎症模型，考察不同浓度蛇毒对炎性细胞因子TNF-α、IL-6、NO分泌的影响，并初步探索其作用机制，为五步蛇蛇毒的深层次开发和利用提供科学依据。

    1 材料

    1.1 细胞系

    小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7(普诺赛生命科技有限公司)。

    1.2 试药

    五步蛇蛇毒(简称蛇毒)取自湖南永州异蛇酒有限公司基地养殖的五步蛇 ......