谢景春，赵玥，黄立慧，程禄萍，金奇，谢保平*(.于都县人民医院烧伤整形外科，江西 赣州99；.赣南医学院心脑血管疾病防治教育部重点实验室，江西 赣州 000；.赣南医学院第一附属医院信息科，江西赣州 000；.赣南医学院科研处，江西 赣州 000)

    骨质疏松症(osteoporosis，OP)是骨骼代谢失衡导致的疾病，其特征是骨量减少和骨组织微结构破坏，导致骨密度下降，骨脆性和骨折发生概率升高[1-2]。破骨细胞和成骨细胞功能失衡是OP的重要发病机制，其中破骨细胞是机体内唯一具有骨吸收功能的多核巨噬细胞。因此，破骨细胞常被作为抗OP 药物研发和机制研究的靶细胞[3]。

    雌激素受体(estrogen receptor，ER)是雌激素和植物雌激素(phytoestrogen，PE)抗骨质疏松作用的主要靶点，特别是ERα。李伟娟等[4]报道淫羊藿苷通过ERα/RANK 信号通路抑制RANKL 诱导的RAW264.7 细胞向破骨细胞分化和骨吸收功能。Xie 等[5]研究发现齐墩果酸上调ERα的表达，并通过ERα/miR-503/RANK 通路抑制破骨细胞分化和骨吸收功能。提示ERα信号通路在破骨细胞分化和抗OP 中扮演了重要的角色。

    杯苋甾酮(结构见图1)是川牛膝中抗OP 的有效成分之一，有研究表明杯苋甾酮可显著增加去卵巢SD 大鼠胫骨的骨密度和最大应力[6]。纪亲龙等[7]研究显示，杯苋甾酮能显著抑制M-CSF 和RANKL 诱导的小鼠源性单核巨噬细胞(BMMs)向破骨细胞分化。然而，未见杯苋甾酮抑制破骨细胞分化和抗OP 的机制研究，特别是在ER 信号通路上的研究。因此，本研究拟用MCF-7 细胞证实杯苋甾酮的拟雌激素样作用，并用ER 竞争性阻断剂ICI 阻断ER，用TRAP 染色、qRT-PCR、Western blot 和分子对接等方法证实杯苋甾酮通过ER 信号通路抑制破骨细胞分化的机制，为杯苋甾酮抗OP 的临床应用提供参考。

    图1 杯苋甾酮化学结构式Fig 1 Chemical structure of cyasterone

    1 材料

    1.1 仪器

    Varioskan Lux 型酶标仪、ABI7500 型聚合酶链式反应(PCR)仪、240i 型培养箱、ST-16R 型离心机(Thermo Fisher Scientific 公司) ......