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编号:619171
木榄胚轴总黄酮通过调节PI3K/Akt信号通路诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡
http://www.100md.com 2022年11月16日 中南药学 2022年第10期
细胞周期,培养基,蛋白,1材料,1细胞株,2试药,3仪器,2方法,1MTT法检测细胞增殖情况,2划痕实验,3流式细胞术检测细胞周期,4流式细胞术检测细胞凋亡率,5Hoechst332
     陈美先,卓清缘,柴民伟,王健松,王羚郦*(.广州中医药大学 中药学院,广州 50006;.北京大学深圳研究生院环境与能源学院,广东 深圳 58055)

    据世界卫生组织统计,2020年结直肠癌在全球的发病率排第三,病死率排第二[1]。目前西医治疗肿瘤以手术、放化疗、分子靶向、内分泌治疗及一些新辅助治疗等综合治疗为主[2-3],但因其毒副作用大且预后差而具有一定的局限性。因此,在植物中寻找天然抗肿瘤活性物质一直是抗肿瘤药物研究的热点。

    木榄(Bruguiera gymnorrhiza)是红树科木榄属植物,是一种传统海洋药用植物,已被《中国药用植物志》《海洋药物》《现代本草纲目》等中草药专著收载。据记载,木榄的叶、胚轴、树皮等部位均可入药,主要功效有清热解毒、止泻、消炎、收敛、止血、截疟等[4-6]。目前已有研究表明木榄胚轴中的一些化合物具有体外抑制肺癌细胞增殖的作用[7],但对其他肿瘤细胞是否具有生长抑制作用,未见相关报道,抗肿瘤的分子机制也尚未完全阐明。

    细胞周期和细胞凋亡在人类组织的正常发育和平衡中发挥着重要作用,同时也与许多疾病状态有关,包括癌症[8]。中药总黄酮提取物是一类潜在的抗肿瘤有效成分[9-11]。在前期研究中初步发现了木榄胚轴的总黄酮(total flavoniods fromBruguiera gymnorrhizahypocotyls,TFBH) 成分具有体外抗结肠癌活性。因此,本研究从木榄胚轴中提取、富集了总黄酮成分,首次探究TFBH对人结肠癌HT-29 细胞增殖和迁移的影响,并结合细胞周期和细胞凋亡共同探究其作用机制,为进一步阐明木榄胚轴的抗肿瘤活性及其作用机制提供参考和依据。

    1 材料

    1.1 细胞株

    人结肠癌细胞株HT-29(武汉普诺赛生命科技有限公司)。采用含10%胎牛血清和含1%双抗生素的McCoy’s 5A 培养基培养细胞,置于37 ℃、5%CO2培养箱中常规培养。

    1.2 试药

    TFBH:用10 倍量的70%乙醇在室温下超声提取1.0 kg 木榄胚轴干燥粉末,过滤后将提取液旋转蒸发浓缩,用适量的水将浓缩后的浸膏溶解,于D101 大孔树脂上分离,分离条件为50%乙醇,低温浓缩干燥后用二甲基亚砜(DMSO)制备成125 μg·μL-1的储备液,置于4℃密封保存;以芦丁为对照品,采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH法[12]测定TFBH 的总黄酮含量为83.02%。所用植物部位于2021年采于深圳福田红树林保护区 ......

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