基于UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS的苦黄注射液化学成分分析
分子离子,分子式,质谱,1材料,1仪器,2试药,2方法,1供试品溶液制备,2色谱条件,3质谱条件,4数据处理,3结果,1苦黄注射液中化学成分分析,2苦黄注射液中主要化合成分的
王允吉,王海丹,刘璐,张引兰,童宁,曹辉*(.南京中医药大学附属南京医院/南京市第二医院药学部,南京 0003;.南京中医药大学附属江苏省中医院药理实验室,南京 009)苦黄注射液源于张仲景《伤寒论》的茵陈蒿汤(茵陈、大黄、山栀),邹良才老中医改良茵陈蒿汤而得到由大黄、苦参、茵陈、柴胡和大青叶组成的苦黄注射液。该药具有清热利湿、疏肝退黄的功效,主治湿热型黄疸,即因湿热内蕴引起的黄疸型病毒性肝炎患者的退黄[1-2]。目前,有关苦黄注射液的研究多集中于临床疗效观察,研究表明苦黄注射液对黄疸型病毒性肝炎[3]、胆汁淤积性肝病[4]、原发性胆汁性肝硬化[5]等疾病均有较好的疗效。
关于苦黄注射液中的化学成分研究仅有针对某类或某几个特征性成分进行定量分析的报道[6-7],尚未见对苦黄注射液中化学成分进行全面分析的研究。超高效液相色谱-四极杆-静电轨道场离子阱质谱(UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS)技术具有高分离性能、高灵敏度及高检测能力,可以进行高精度的定量和定性分析,已广泛用于中药成分分析、药物动力学、体内药物分析等领域[8]。本研究首次采用UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS 对苦黄注射液中化学成分进行全面分析,并对其进行药材归属,为明确苦黄注射液药效物质基础,阐明其药理学作用机制提供实验依据。
1 材料
1.1 仪器
Thermo Q-Extractive 液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用仪(含高压二元泵、自动进样器、柱温箱、四极杆-静电场轨道阱质量分析器)、Xcalibur 3.1 数据分析系统(美国Thermo公司);Heraeus Multifuge X1R 冷冻离心机(美国Thermo 公司);ACQUITY UPLC HSS T3 色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8 μm,美国Waters 公司);Milli-Q Direct 超纯水仪(德国默克Millipore 公司)。
1.2 试药
苦黄注射液(常熟雷允上制药有限公司,批号:2106281,规格:10 mL);乙腈、乙醇(HPLC 级,德国Merck 公司);甲酸(HPLC 级,美国Sigma-Aldrich 公司);纯水取自超纯水仪。
2 方法
2.1 供试品溶液制备
吸取苦黄注射液1 mL,加入纯乙醇溶液3 mL 沉淀后,于2~8℃冰箱中放置24 h 后,离心5 min(4 ℃、12 000 r·min-1) ......
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