陈馨，刘霞霞，王文君，王萌，程卉*(1.安徽中医药大学药学院，合肥 230012；2.安徽中医药大学科研技术中心，合肥 230038)

    恶性黑色素瘤是由黑色素细胞恶性转化后形成的恶性肿瘤，其发病位置大多集中在皮肤表面，但有时也会在黏膜组织如眼脉络膜等其他身体部位发现[1]。黑色素瘤的发展是一个动态的过程，容易发生转移形成血管瘤，具有高侵袭性，是皮肤病变中病死率最高的一种疾病，目前其发病率在全球范围内呈上升趋势[2-5]。目前研究发现与铁死亡相关的细胞死亡途径对于黑色素瘤的调节具有关键作用，与未处理的细胞相比，铁死亡抑制剂预处理细胞后会导致黑色素瘤细胞发生更多转移[6]。这表明新的黑色素瘤的治疗方法的开发可以从参与铁死亡调节的靶点入手。

    铁死亡是最近发现的一种调控细胞死亡形式。其形态学特征是存在比正常线粒体更小的线粒体，线粒体膜密度浓缩，线粒体嵴减少或消失，外线粒体膜破裂。而影响铁死亡的因素有亚铁、活性氧(ROS)和谷胱甘肽过氧化物酶 4(GPX4)[7]。在形态学、生化和遗传水平上，铁死亡与其他调控细胞死亡的形式不同。研究表明，人类和动物的多种生理条件和病理应激均可引发铁死亡[8]。

    重楼为合科植物云南重楼ParispolyphyllaSmithvar.Yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz .或七叶一枝花Paris polyphylla Smithvar.chinensis(Franch.)Hara 的干燥根茎[9]，是一种常用中药，至今有两千多年的用药历史，性苦，微寒，具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊的功效。其化学成分主要有甾体皂苷类、胡萝卜苷、氨基酸类的有效成分等，其中重楼皂苷Ⅱ是重楼主要有效成分之一。据报道，重楼皂苷Ⅱ在肺癌、膀胱癌、卵巢癌、黑色素瘤等癌症中均表现出较好的抗肿瘤特性[10-14]。本实验旨在研究重楼皂苷Ⅱ抑制黑色素瘤的增殖，并探讨其抑制黑色素瘤B16F10细胞增殖是否通过诱导肿瘤细胞铁死亡来介导。

    1 材料

    1.1 细胞株

    黑色素瘤细胞 B16F10(中国科学院细胞库)。

    1.2 试药

    重楼皂苷Ⅱ(纯度91.4%，中国食品药品检定研究院)。胎牛血清(上海逍鹏生物科技有限公司)；Roswell Park Memorial Institute-1640(RPMI-1640)培养基(武汉塞维尔生物科技有限公司)；青霉素-链霉素溶液、ROS试剂盒、BCA蛋白浓度试剂盒、一抗稀释液(碧云天生物技术有限公司)；丙二醛(MDA)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、谷胱甘肽(GSH)试剂盒、Fe 试剂盒(南京建成生物工程研究所)；β-肌动蛋白(β-actin ......