高长久，卢芳，柳长凤，于栋华，丁崧，刘树民*(. 黑龙江中医药大学研究生院，哈尔滨 50040；.黑龙江中医药大学中医药研究院，哈尔滨 50040)

    格雷夫斯病(Graves disease，GD)是一种发生于甲状腺的自身免疫性疾病，以促甲状腺激素(TSH)受体刺激抗体(TRAb)的发现为特征，主要表现为弥漫性甲状腺肿、甲状腺毒症和眼病。在所有甲状腺功能亢进(以下简称甲亢)患者中，有80%左右的病例被诊断出患有GD。当前，治疗GD主要有放射性碘、抗甲状腺药物和甲状腺切除术三种方式[1-2]，但这些方式存在复发率高、易伴发甲状腺功能减退等问题[3]。

    MicroRNA(miRNA)是内源性、单链的非编码微小RNA，长度一般为19～25个核苷酸。miRNA可以通过抑制mRNA翻译或促进靶RNA降解来下调编码蛋白基因的表达[4]，广泛参与炎性介质的释放、免疫反应的调控、血管的形成等诸多重要生物学事件[5]。近年来，越来越多的研究表明miRNA在GD的发生发展中起着重要作用[6-8]。

    GD属于中医“瘿病”范畴，初期多为气机郁滞，继而津凝痰聚，痰气搏结颈前；进而肝气郁结，日久化火，火热内盛，耗气伤阴，导致气阴两虚之候[9]。基于上述认识，刘树民教授通过多年临床经验总结并创建了补气滋阴、清肝降火、化痰散结之验方——芪玄抑甲宁，广泛应用于临床，并取得了良好的疗效。前期药效学研究已证实芪玄抑甲宁对GD有显著改善作用，本研究旨在通过miRNA测序技术，从表观遗传学角度探索其在GD模型小鼠甲状腺组织中的作用靶点及改善GD甲亢的作用机制。

    1 材料

    1.1 试药

    芪玄抑甲宁组方五味中药黄芪-玄参-牡蛎-浙贝母-夏枯草配伍比例为3∶2∶2∶2∶1(黑龙江修生堂药业有限公司，批号分别为20190401、20190401、20200601、20191101、20190701)，经黑龙江中医药大学药学院中药资源与开发教研室王振月教授鉴定为正品饮片，符合2020年版《中国药典》饮片性状规定，按照最优工艺进行提取[10]，制备成冻干粉；甲巯咪唑片(Merck KGaA，批号：C10002097)。

    Ad-TSHR289重组腺病毒(赛业生物科技有限公司，滴度3.13×1011PFU·mL-1)；小鼠三碘甲腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、促甲状腺激素(TSH)ELISA试剂盒(江苏晶美生物科技有限公司，批号分别为202112、202112、202201)；VAHTSTM Small RNA Library Prep Kit for Illumina、VAHTSTM DNA Clean Beads试剂盒(南京诺唯赞生物科技股份有限公司 ......