罗梦花，陈佩文，陈志红，吴民华，龚先玲*(. 广东医科大学药学院，广东 东莞 53808；. 广东医科大学基础医学院，广东 东莞 53808)

    结直肠癌(colorectal cancer，CRC)是常见的消化道恶性肿瘤之一。化疗是肿瘤的治疗方式之一，虽然在临床上出现了许多抗肿瘤的化疗药物，并且配合放疗可以使患者的病情有所好转，延长了寿命，但这些化疗药物常常会导致人体出现各种不良反应和毒副作用，从而使肿瘤患者在治疗过程中产生其他疾病或损伤。中草药具有使用历史悠久，毒副作用相对较小，效果较好等优势，因此从中草药中开发新的防治肿瘤的天然药物是研究方向之一。5F是岭南草药半边旗中的一种二萜类成分，全称为11β-hydroxy-15-oxo-16-ent-kaur-16-en-19-oic acid或 ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid[1]，具有抗炎、抑制多种肿瘤细胞增殖等作用[2-5]。但关于5F对结直肠癌的影响报道很少。本研究探讨二萜化合物5F对结直肠癌细胞凋亡及自噬的影响，并初步探究其抗肿瘤作用的机制。

    1 材料

    1.1 试药

    5F(HPLC纯度≥98%；广东医科大学天然药物研究与开发重点实验室自制)[4]。二甲基亚砜(DMSO)、MTT(法国MP公司)；Hoechst 33342(Beyotime公司)；z-VAD-fmk(R&D systems公司)；吖啶橙(AO)、氯喹(CQ)(美国Sigma公司)。人结直肠癌细胞SW480、HCT116(中国科学院上海细胞库)。RPMI 1640培养液、胎牛血清(美国Gibco公司)；青-链霉素混合液(北京Solarbio科技有限公司)；蛋白定量试剂盒(美国Thermo公司)；Anti-Pro-Caspase-3、Cleaved Caspase-3、PARP、Bax、Bcl-2、LC3A/B抗体(美国Cell Signalling Technology公司)；β-actin(北京中杉金桥公司)；辣根过氧化物(HRP)标记山羊抗兔、HRP标记山羊抗鼠二抗(武汉Boster 公司)；ECL 化学发光试剂盒(美国Millipore公司)。

    1.2 仪器

    Nikon Ti-S型倒置荧光显微镜(日本Nikon公司)，Thermo Scientific Multiskan Sky全波长酶标仪(美国Thermo公司)，化学发光成像仪MiniChemi Ⅱ(北京赛智创业科技有限公司) ......